摘要:

（目的）构建猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）E基因真核表达载体pCI—E，为探讨E基因的功能奠定基础。（方法）根据GenBank上已发表的PEDVCV777株序列，利用Primer5．0设计1对两端含限制性核酸内切酶EcoRI和SalI酶切位点的特异引物，用反转录聚合酶链式反应（RT—PCR）扩增出完整的231bp的目的基因，将目的基因与pMD19-T载体连接转化到大肠杆菌DH5a中，用测序、PCR、双酶切鉴定阳性克隆体。然后将纯化后的E基因插入表达载体（pCI—neo）上，并经双酶切、测序鉴定。（结果）成功构建了PEDV的pCI—E重组真核表达载体。（结论）pCI—E重组真核表达载体的构建为进一步探讨PEDVE基因的功能和分子生物学特性及PED防御新途径提供依据。

摘要:

某规模猪场新生仔猪发生了一起以呕吐、腹泻和伴随脱水为主要特征的仔猪病毒性腹泻,通过临床诊断和实验室检测最终确定致病原为猪流行性腹泻病毒,采取了系列针对性治疗措施病情得到了有效控制.

摘要:

总结了猪腹泻病的病原、发病机理、流行病学、临床症状、病理解剖、鉴定诊断、免疫及防制。

摘要:

为建立同时快速检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重PCR方法.本研究根据GenBank中登录的PEDV和PCV3基因组序列,分别在M基因和Rep基因高度同源保守区设计2对特异性引物,建立了检测PEDV和PCV3双重PCR方法,即可同时扩增225 bp(PEDV)和138 bp(PCV3)2条特异性片段,而该方法对猪传染性胃肠炎病毒、猪博卡病毒、猪圆环病毒2型、大肠杆菌核酸扩增均为阴性;PEDV和PCV3的最低检出量分别为428和325拷贝/μL,且特异性强、敏感性好,为快速、高效检测PEDV和PCV3提供了技术帮助.

摘要:

为了制备抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单克隆抗体(MAb),本试验将Vero细胞中增殖的PEDV超速离心纯化,作为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术和PEDV重组S蛋白为基础的间接ELISA方法,制备并筛选能稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞;分别采用间接ELISA、Westernblot和间接免疫荧光(IFA)试验,对单克隆抗体的亚型、特异性等生物学特性进行鉴定.结果表明,本试验成功获得了1株稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞株5C3.MAb亚类鉴定为IgM,轻链为k型.杂交瘤细胞连续传至20代,细胞培养上清液和小鼠腹水抗体效价分别稳定在1∶600和1∶10 000.特异性试验结果显示,MAb不与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪伪狂犬病毒(PrV)、猪圆环病毒(PCV2)发生交叉反应.west-ern-blot结果显示,MAb能特异性识别PEDV的重组S蛋白.IFA试验结果表明,MAb能与PEDV感染的vero细胞产生特异性荧光.说明本试验获得的MAb能特异性识别重组及天然的PEDV S蛋白,具有良好的抗原性和特异性.

摘要:

为临床上能鉴别猪流行性腹泻病毒(PEDV)野毒株和疫苗株,根据GenBank中已发表的PEDV疫苗株ORF3基因序列,在245～293位缺失区域两侧设计合成1对特异性引物,建立了快速鉴别和诊断PEDV野毒株和疫苗株的RT-PCR方法,即PEDV野毒株、疫苗株基因组中分别可扩增出长度为282和233bp的特异性片段,而对猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪博卡病毒、猪伪狂犬病毒核酸扩增均为阴性;对PEDV野毒株与疫苗株的最低检测下限分别为455拷贝/μL和396拷贝/μL.该方法不仅能够有效区分PEDV野毒株和疫苗株,而且能够鉴别发病猪的感染情况,为该病的防控提供了有效地技术保障.

摘要:

为获得猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒卵黄抗体的消长规律,采用猪PEDV-TGEV腹泻病毒二联灭活疫苗免疫健康鸡,刺激机体反应生成血清抗体和卵黄抗体,采集血清和高免蛋.用水稀释法和饱和硫酸铵盐法提纯卵黄抗体,并用PEDV和TGEV抗体检测试剂盒和自建ELISA法监测抗体消长规律.结果获得了卵黄抗体浓度、卵黄抗体、血清中抗体的变化趋势.卵黄抗体浓度最高可达9.5 mg/mL,2种病毒卵黄抗体OD450值高达2.900,血清中效价最高达到5 000,高效价抗体可以维持5周以上.结果表明:卵黄抗体浓度和卵黄抗体效价变化幅度小、稳定性好、持续时间久,为临床上开发利用猪病毒性腹泻卵黄抗体提供理论依据和技术支持.

摘要:

为了临床上能够快速检测出猪流行性腹泻病毒(PEDV)以及传染性胃肠炎病毒(TGEV),本研究根据GenBank中收录的PEDV和TGEV的基因序列,分别设计两对特异性引物,针对本实验室保存的毒株进行了双重RT-PCR检测方法的建立及条件的优化,结果特异性良好,表明该研究建立的双重RT-PCR检测方法操作简单、特异性好,具有较高的检测灵敏性,为PEDV和TGEV的快速鉴别诊断和流行病学调查研究提供了更为敏感、快捷、可靠的技术手段.

摘要:

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)核蛋白N对Vero E6细胞核仁蛋白B23.1的影响,将本实验室构建的DsRed-N1/B23.1重组质粒转染Vero E6细胞,转染6h后接种PEDV,分别在转染后12、18 h和24 h三个时间点,进行病毒感染细胞的间接免疫试验,同时设未感染对照组,而后利用激光共聚焦显微镜分析感染和转染细胞中B23.1蛋白的变化.结果表明,PEDV N蛋白与Vero E6核蛋白B23.1有共定位特征,在PEDV感染Vero E6细胞12h后,B23.1蛋白开始发生变化,随着时间的延长逐渐碎裂、分散.这个结果提示,病毒可能通过破坏核仁的结构和核仁蛋白的功能,进而为病毒的复制提供便利.

摘要:

本试验通过对22株采集于2015-2018年广东省内猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株的M基因进行克隆和测序,并将测序结果与NCBI中PEDV参考株M基因进行同源性分析和构建系统进化树,从而了解广东省PEDV流行株的近年来遗传变异情况.结果 显示,22株PEDV流行株间核苷酸序列同源性为97.5％ ～ 100.0％,与华南地区参考株M基因核苷酸序列同源性为97.7％～99.9％,与国内较早分离株CH/S和经典毒株CV777同源性较低,分别为97.5％ ～98.1％、97.7％～ 98.2％.PEDV M基因遗传进化分析显示,22株广东PEDV流行株的同源性较高,亲缘关系紧密,此外,22株广东PEDV流行株与大部分代表性毒株、疫苗株亲缘关系较远,如国内早期分离株CH/S、经典毒株CV777、韩国株KRPEDV-9-Vaccine、泰国株M_NIAH100541_08、日本株JMe2、英国株Brl/87等.试验结果表明,广东省当前的PEDV流行毒株存在基因变异并形成独特进化分支.