摘要:

根据Genbank上发表的猫泛白细胞减少症基因序列数据,设计了3对引物,并采用PCR方法对从东北虎粪便中分离出的FPV-HLJ的结构蛋白VP1、VP2和非结构蛋白NS1基因进行了扩增,将各片段克隆至pMD18-T载体,经PCR鉴定后进行了序列测定和分析.结果显示:FPV-HLJ与GenBank上公布的FPV、CPV和MEV毒株相比,核苷酸序列同源率VP1为98.8%～99.8%,VP2 为98.1%～99.4%,NS1为98.6%～99.7%.VP1氨基酸同源率为97.6%～99.2%,VP2、NS1氨基酸同源率与其核苷酸同源率相同.并且VP1、VP2和NS1上分别有 4、3和9处氨基酸发生变异.

摘要:

利用PCR技术从FPV-HLJ株病毒细胞培养物中扩增VP2基因主要抗原表位区片段VP2'.扩增片段克隆至pMD18-T载体,经核苷酸序列测定确认后,亚克隆于pGEX-6p-1原核表达载体,构建pGEX-6p-VP2'重组原核表达质粒.将该质粒转化至表达菌BL21(DE3)中用IPTG进行诱导表达.表达蛋白采用切胶法纯化,并用SDS-PAGE和Western blot检测纯化蛋白纯度和抗原特异性.结果表明,VP2基因全长1200bp,编码400个氨基酸.重组菌可表达相对分子量约为66kD的融合蛋白,包括目的蛋白40kD和GST标签26kD.该蛋白以包涵体形式存在,且GST融合蛋白具有良好抗原特异性.

摘要:

猫泛白细胞减少症(FP)是由猫泛白细胞减少症病毒(FPV)引起的猫科动物的急性高度接触性传染病,临床上常以发热、呕吐、腹泻、脱水、肠炎以及白细胞极度减少为主要特征.本病传播速度快,对猫科动物危害极大.近年来,西安地区家养猫数量不断增加,患FP的病例也随之增多.为了解西安地区家养猫FPV感染和发病情况,为本病的防控提供基础资料,2013年7月~2015年7月,用猫泛白细胞减少症病毒检测试剂盒,对西安市部分宠物(动物)医院接诊的疑似FP病猫的467份粪便进行FPV检测,共检出阳性样品71份,占15.2%(71/467),其中2013年5份,2014年57份,2015年9份;阳性患猫中未免疫接种FPV疫苗的有70份,占98.6%(70/71).确诊病例中47.9%(34/71)临床出现呕吐症状,71.8%(51/71)出现腹泻症状.血液分析发现,84.51%的FPV感染猫的白细胞低于正常值;对71个患猫进行对症和支持治疗后存活率为83.1%(59/71).

摘要:

利用细胞培养方法从中国某虎园送检的腹泻虎肠内容物中分离出1株细小病毒(TPV/HT-69),经系统的形态学、理化学、血清学试验、人工感染试验、PCR扩增和VP2基因序列分析,符合猫泛白细胞减少症病毒特征,证明该毒株为猫泛白细胞减少症病毒强毒.

摘要:

为了解猫泛白细胞减少症病毒(FPLV)、犬细小病毒(CPV)、水貂肠炎病毒(MEV)氨基酸遗传演化规律,探索细小病毒在不同种属动物间跨种传播过程中病毒蛋白氨基酸差异特点以及毒株流行病学特征.通过搜集确定为CPV、MEV的粪便病料,PCR扩增克隆非结构蛋白NS1和结构蛋白VP2基因,并参考GenBank中其他细小病毒毒株,对其推导的氨基酸序列构建遗传发育树,进行病毒的遗传进化分析,同时对细小病毒流行毒株的非结构蛋白NS1和结构蛋白VP2基因编码的氨基酸差异位点进行了归纳总结.遗传进化分析结果表明,细小病毒不同种属以及同种属各亚型之间NS1蛋白氨基酸同源性高于VP2蛋白,但氨基酸差异较小.FPLV和MEV NS1和VP2蛋白原本保守的氨基酸,在遗传进化的过程中出现与CPV一致的突变(NS1蛋白第247、350、545、595位氨基酸；VP2蛋白第101、232、411位氨基酸).FPLV、MEVVP2蛋白氨基酸在进化过程中不同于CPV,但是更加稳定.我国CPV分离毒株中,CPV-2a亚型VP2蛋白Ile324位氨基酸独特位点仍然存在.

摘要:

【目的】分析广州地区猫泛白细胞减少症病毒( Feline panleukopenia virus, FPLV)的自然重组、跨宿主传播以及流行变异情况。【方法】采集疑似感染猫泛白细胞减少症病毒的猫粪便样品进行细胞分离,并对阳性病料提取基因组DNA,PCR扩增获得病毒的全基因组序列,并与GenBank中相关的参考毒株序列进行遗传进化分析,同时对VP2基因与NS1基因的主要氨基酸位点进行差异分析。【结果】成功获得2株猫泛白细胞减少症病毒及其全基因组序列。遗传进化分析显示,广州地区分离的猫泛白细胞减少症病毒FPLV-GZ01、FPLV-GZ02与我国其他分离毒株FPLV-XJ01、FPLV-HRB属同一分支,提示FPLV-GZ01、FPLV-GZ02由FPLV-XJ1进化而来；NS1基因系统进化树显示,FPLV存在与CPV-447重组的可能。主要氨基酸位点分析显示,FPLV在VP2基因中的主要氨基酸位点上的遗传变异比CPV保守；在NS1基因上发现FPLV-GZ01、FPLV-GZ02分别存在不同程度的氨基酸位点突变。【结论】广州地区分离的猫泛白细胞减少症病毒仍在不断地重组进化。

摘要:

为分析当前猫泛白细胞减少症病毒(FPLV)基因组遗传变异情况,对FPLV胶体金试纸条检测结果为阳性的猫粪进行病毒分离,通过血凝、分子生物学等试验对分离株进行鉴定.结果表明:病毒在CRFK细胞上盲传5代后产生明显细胞病变,电镜观察病毒粒子直径约25 nm,分离病毒的血凝效价为1∶256,将分离株命名为FPLV BJ04.基因组扩增结果显示,FPLV BJ04基因组大小为5 118 bp.决定病毒宿主范围和抗原性的VP2蛋白系统进化树分析表明,FPLV BJ04株与2017年意大利分离株KX434462株位于同一分支;分离株的VP2、NS1基因与GenBank收录的FPLV VP2、NS1基因相似性分别为99.1％～99.5％和99.0％～99.5％.动物回归试验中攻毒组猫出现临床症状和病理变化.本研究对分离的FPLV北京流行株的VP2和NS1基因进行遗传变异分析,可为更好地预防和控制FPLV提供基础.

摘要:

为了调查猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)在猫群中的流行情况,根据GenBank已登录的FPVVP2基因序列设计PCR引物,建立了FPV PCR快速检测方法,并对3004份猫样品进行了检测.结果显示,该方法扩增的VP2基因片段为468 bp左右,检出的最小基因组DNA浓度为6.19× 10-8 μg/μL,检出DNA浓度低于1fg/μL,从3004份样品中检测出13份猫泛白细胞减少症病毒核酸阳性样品.本研究针对FPV VP2基因建立的PCR快速检测方法可作为FPV临床早期诊断及快速筛查手段.