摘要:

目的 观察在囊胚复苏周期中,RapidWarm Blast玻璃化解冻液对囊胚的复苏效果.方法 回顾性分析2018年12月至2019年12月在安徽医科大学第一附属医院首次行囊胚复苏移植的655例患者临床资料,根据囊胚解冻液不同分A组357例及B组298例.A组采用传统Vitrification Media解冻液进行囊胚复苏,B组采用新型RapidWarm Blast解冻液复苏.比较两组囊胚复苏后整体存活率,解冻2h后囊胚重扩张率、孵化率,囊胚种植率及临床妊娠率;同时比较两种解冻液对囊胚不同发育阶段(第5天囊胚、第6天囊胚)的重扩张率、孵化率及临床妊娠率的影响.结果 两组囊胚复苏后的存活率、重扩张率、孵化率、临床妊娠率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);B组囊胚种植率(55.45％)高于A组(48.76％),差异有统计学意义(P<0.05).两组中发育第5天的囊胚复苏2 h后重扩张率及孵化率均高于发育第6天的囊胚,差异均有统计学意义(P<0.05);两组间发育第5天的囊胚复苏2 h后重扩张率及孵化率比较,差异无统计学意义(P>0.05),B组发育第6天的囊胚复苏2 h后扩张率及孵化率均高于A组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 新型RapidWarm Blast解冻液用于囊胚玻璃化复苏,可获得与传统的Vitrification Media相似的临床结局,但新型解冻液对发育第6天囊胚的复苏效果更好,胚胎种植率更高.

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目的:构建重组表达HBx的腺病毒,并通过感染细胞建立HBx高表达的细胞模型.方法:首先将HBx基因插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack 中,限制性酶切鉴定正确后将其用PmeⅠ酶切线性化,转到BJ5183感受态细菌进行同源重组,重组后的腺病毒载体pAd-HBx经PacⅠ酶切线性化后,转染到QBI-293A细胞中,根据EGFP的表达判断重组腺病毒的包装情况.RT-PCR鉴定重组腺病毒的HBx基因表达.根据GFP的表达检测病毒滴度和感染效率.将病毒感染人肝癌HepG2细胞,48 h后收集裂解细胞,Western blot检测HBx蛋白的表达.结果:重组腺病毒载体pAd-HBx经酶切鉴定确认构建成功.将pAd-HBx转染到QBI-293A细胞,荧光检测提示病毒获得成功包装,RT-PCR检测到细胞中HBx基因的表达.重组病毒感染人肝癌HepG2细胞,Western blot检测到HBx蛋白表达.结论:成功构建了携带HBx基因的重组腺病毒,感染肝癌HepG2细胞后检测到了HBx蛋白的表达,提示建立了HBx高表达的细胞模型,为后续的HBx的功能研究奠定了基础.

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目的:观察苦参素对人胃癌细胞系MGC-803的增殖抑制作用.方法:人胃癌细胞系MGC-803接种培养24 h后,实验组分别加入不同浓度苦参素(0.25 g/L、0.5 g/L、1g/L、2g/L、4 g/L),阳性对照组与阴性对照组分别加入氟尿嘧啶(2g/L)和培养液,继续培养12 h,24 h,36 h,48 h,采用MTT法测定苦参素对MGC-803细胞的增殖抑制情况.判定苦参素的剂量与MGC-803细胞增殖活性间的关系,计算细胞抑制率和群体倍增时间.结果:苦参素在0.25～4 g/L范围内,对MGC-803细胞的增殖活性具有抑制作用,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.001),且该作用随剂量增加而增加.与阴性对照组比较,阳性对照组和实验组细胞群体倍增时间增加.结论:苦参素对人胃癌细胞系MGC-803有明显的增殖抑制作用,且具有时间、剂量效应关系.

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目的:探讨肿瘤相关抗原(TAAs)P53、Survivin、IMP1、Cyclin D1、C-myc及Cyclin E自身抗体联合CA125检测对卵巢癌早期诊断的价值.方法:应用间接ELISA法检测78例原发性上皮性卵巢癌、60例卵巢良性肿瘤、100例正常对照血清中以上6种TAAs抗体,电化学发光法测定血清CA125含量.结果:卵巢癌患者血清中TAAs抗体的阳性率高于正常对照组(P均<0.05),每种TAA单独检测的阳性率为11.5%～35.9%;对6种TAAs抗体进行组合,随着联合抗体数目的增加,检测阳性率随之增加,6种TAAs抗体联合检测的阳性率为55.1%;6种TAAs抗体联合CA125检测卵巢癌的灵敏度为96.2%,特异度为76.0%,阳性预测值为75.8%,阴性预测值为96.2%,阳性似然比为6.25,阴性似然比为0.14;6种TAAs抗体联合CA125检测早期卵巢癌的阳性率为89.3%,明显高于单独应用CA125的检测阳性率(χ2=4.909,P=0.027).结论:利用6种TAAs抗体组合检测卵巢癌具有较高的真实性,可能为卵巢癌诊断提供一定的参考价值;6种TAAs抗体联合CA125检测可明显提高卵巢癌的检测灵敏度,特别是对早期卵巢癌的检测可能具有重要价值.

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目的:探讨上皮性卵巢癌组织中胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白1(IMP1)蛋白及mRNA的表达与上皮性卵巢癌发生发展的关系.方法:采用免疫组化法和RT-PCR技术检测47例上皮性卵巢癌(恶性组)、28例上皮性卵巢良性肿瘤(良性组)及20例正常卵巢上皮组织(正常组)中IMP1蛋白和mRNA的表达情况,并分析IMP1蛋白表达与上皮性卵巢癌的临床病理特征的相关性.结果:上皮性卵巢癌、上皮性卵巢良性肿瘤及正常卵巢上皮组织中IMP1蛋白的阳性表达率分别为85.1％、32.1％和10％,IMP1mRNA相对表达量分别为0.652±0.067、0.120±0.014和0.085 ±0.011.卵巢癌组织中IMP1蛋白及mRNA表达量均显著高于正常组和良性组(P＜0.05),而后两组则无显著差异(P＞0.05).上皮性卵巢癌组织中IMP1蛋白表达与FIGO分期和病理组织学分级有关(P＜0.05),而与有无腹水、淋巴结转移无关(P＞0.05).结论:IMP1可能参与上皮性卵巢癌的发生发展过程.

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目的:探讨17-β雌二醇对血管性痴呆(VD)大鼠认知功能及脑组织神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响.方法:健康雄性Wistar大鼠48只,随机分为正常对照组、模型组、雌二醇组,各组均16只.采用结扎双侧颈总动脉方法制备慢性前脑缺血动物模型后,雌二醇组腹腔注射17-β雌二醇,其余2组腹腔注射花生油.60 d后应用Y迷宫、ELISA法分别检测VD大鼠认知功能以及脑组织中NGF和BDNF含量变化.结果:大鼠学习尝试次数、记忆测试10次的正确次数与正常对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),认知功能显著改善;模型组、雌二醇组脑内NGF和BDNF的含量较正常对照组均增高,雌二醇组脑组织内NGF和BDNF的含量较模型组增高(P均＜0.01).结论:腹腔注射17-β雌二醇可显著改善VD大鼠的认知功能,增加VD大鼠脑内NGF和BDNF含量,具有脑保护作用.

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本发明公开了一种用MspI鉴定人HOTAIR基因多态性rs920778的方法，抽提样品的基因组DNA；提供扩增人HOTAIR基因多态性rs920778位点附近序列的正向引物和反向引物，以所述待测人基因组DNA为模板，进行PCR扩增反应，获取扩增产物；使用限制性内切酶对所述扩增产物进行酶切，获取相应的酶切产物；将酶切产物采用3％的琼脂糖凝胶进行电泳，以判定HOTAIR基因多态性rs920778的各基因型。本发明建立的HOTAIR?rs920778多态性的检测方法，内切酶价格十分便宜，同时PCR产物纯度较高，酶切结果易于分辨。该检测方法通过测序验证，其结果准确可靠。

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本发明公开了一种用MspI检测人胃癌易感基因IL-1RN多态性rs9005的方法，采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法，是采用聚合酶链式反应扩增目的DNA片段，然后将待检测的DNA片段用限制性内切酶酶切，限制性内切酶识别并切割特异的序列，然后将酶切后的产物进行电泳，再由限制酶图谱分析此段序列的特异切位点，藉由片段的多样性来比对不同来源基因序列的差异性。简而言之，就是先PCR扩增相应目的片断，而后进行限制性内切酶切反应，电泳后观察比较限制性图谱来分析序列之间的差异。该方法重复性好，操作较简单，成本低，酶切结果容易辨识。

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目的:探讨细胞色素P4501A1(CYP1A1)Ile/Val位点基因多态性与食管癌发生的关系.方法:对国内外1997至2008年采用病例对照方法研究CYP1A1 Ile/Val基因多态性与食管癌发生关系的14篇文献(累计食管癌病例1158例、对照2154例)进行meta分析,应用显性模型(突变基因型Ile/Val+Val/Val与野生基因型Ile/Ile比较)先进行综合定量分析,再按病理类型(鳞癌/腺癌)分亚组进行分析.结果:综合分析显示携带CYP1A1突变基因型(Ile/Val+Val/Val)的个体发生食管癌的危险性是野生型的1.39倍(95%CI 1.07～1.80);亚组分析显示突变基因型与食管鳞癌发生的易感性有关但与食管腺癌无关,OR值分别为1.43(95%CI 1.07～1.91)和1.20(95%CI 0.62～2.30).结论:CYP1A1 Ile/Val位点突变基因型可增加食管鳞癌发生的危险性,但与食管腺癌无关.

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