重组表达乙肝病毒x蛋白的腺病毒构建及在HepG2细胞的表达

• 作者: 周育森 张慧娜 张红飞 户义 李军锋 王凯娟 鲍春旸
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒载体 HBx基因 肝癌细胞
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 450-453
• 分类号: R575.1
• 字数: 2927字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2012.04.008

摘要

目的:构建重组表达HBx的腺病毒,并通过感染细胞建立HBx高表达的细胞模型.方法:首先将HBx基因插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack 中,限制性酶切鉴定正确后将其用PmeⅠ酶切线性化,转到BJ5183感受态细菌进行同源重组,重组后的腺病毒载体pAd-HBx经PacⅠ酶切线性化后,转染到QBI-293A细胞中,根据EGFP的表达判断重组腺病毒的包装情况.RT-PCR鉴定重组腺病毒的HBx基因表达.根据GFP的表达检测病毒滴度和感染效率.将病毒感染人肝癌HepG2细胞,48 h后收集裂解细胞,Western blot检测HBx蛋白的表达.结果:重组腺病毒载体pAd-HBx经酶切鉴定确认构建成功.将pAd-HBx转染到QBI-293A细胞,荧光检测提示病毒获得成功包装,RT-PCR检测到细胞中HBx基因的表达.重组病毒感染人肝癌HepG2细胞,Western blot检测到HBx蛋白表达.结论:成功构建了携带HBx基因的重组腺病毒,感染肝癌HepG2细胞后检测到了HBx蛋白的表达,提示建立了HBx高表达的细胞模型,为后续的HBx的功能研究奠定了基础.