摘要:

目的：探讨RNA干扰沉默HDAC1基因对人类胃癌MGC803细胞增殖、凋亡及组蛋白乙酰化水平的影响。方法设计针对HDAC1基因小干扰RNA片段，经脂质体转染入MGC803细胞，RT-PCR及Western blot鉴定其干扰效果；MTT法绘制细胞生长曲线，TUNEL分析细胞调亡，Western blot检测组蛋白H3、H4乙酰化、组蛋白H3K9甲基化的影响及凋亡相关蛋白BCL-2、pro-caspase-9、pro-caspase-3、C-myc蛋白表达。结果 HDAC1 siRNA转染MGC803细胞后，HDAC1基因的mRNA、蛋白表达均明显下降，有统计学意义（P<0.05）；60、120、240 nmol/L HDAC1 siRNA处理24 h后，细胞凋亡率分别为（18.5±3.5）%、（41.4±4.3）%、（59.2±5.5）%，而对照组仅为（4.8±2.7）%，有统计学意义（P<0.05）；同时下调Bcl-2、proCaspase-9、proCaspase-3、c-Myc的表达；上调细胞周期蛋白P21的表达；干扰HDAC1基因可上调组蛋白H3，H4乙酰化水平，下调H3K9甲基化水平。结论干扰HDAC1基因表达后可能通过上调与基因转录激活有关的组蛋白H3、H4乙酰化水平，下调与基因转录抑制有关H3K9甲基化水平，从而抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡。

摘要:

摘要:

目的探讨IL-10干预对实验性肝纤维化大鼠肝星状细胞EGF、HGF表达的影响及其抗纤维化作用的可能机制. 方法 60只♂SD大鼠随机分为正常对照组(N组,8只)、肝纤维化模型组(C组,28只)和IL-10干预组(I组,24只),分别于CCl4造模第7周及11周采用链霉蛋白酶E、Ⅳ型胶原酶经门静脉灌注分离肝星状细胞.半定量RT-PCR法检测各组新分离肝星状细胞中EGF、HGF mRNA表达水平;S-P免疫细胞化学法检测各组原代培养3天后肝星状细胞EGF的表达.并于上述两个时间段分别将各组肝组织行HE染色判断炎症和肝纤维化程度.结果成功建立大鼠肝纤维化模型和分离大鼠肝星状细胞.与正常组相比,纤维化模型组EGF、HGF的mRNA水平显著升高(P<0.01),经IL-10干预后则明显降低(P<0.01).对EGF而言,IL-10组表达量高于正常组(P<0.05);对HGF而言,IL-10组皆低于正常组(P<0.05).肝纤维化模型组EGF mRNA水平在第11周较第7周有进一步的升高(P<0.05).SP免疫细胞化法检测各组EGF的蛋白表达情况与上述mRNA结果相平行.结论 EGF、HGF随肝纤维化进程逐渐升高,IL-10可抑制纤维化大鼠肝星状细胞EGF、HGF的表达,具有抗纤维化作用.

摘要:

目的 探讨未成年人行结肠镜检查的原因、检查情况及检出疾病特征.方法 回顾性分析行结肠镜检查的105例未成年人的临床资料及肠镜结果,按年龄分为0 ～ 6 岁组、 7 ～ 14 岁组、15 ～ 18 岁组.结果 105 例患者行结肠镜检查的主要原因为便血、腹痛;盲肠插管率79. 8％.共检出肠道病变70 例,主要为息肉及炎症性肠病.0 ～ 6 岁组息肉检出率最高;幼年性、腺瘤性息肉常见;0 ～ 6 岁组腺瘤性息肉、息肉伴低级别上皮内瘤变较其他两组常见.结论 便血及腹痛是未成年人行结肠镜检查的主要原因.息肉及炎症性肠病为主要肠道病变.0 ～ 6 岁腺瘤性息肉及息肉伴低级别上皮内瘤变检出率最高.

摘要:

目的 检测5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)和15-脂氧合酶-1(15-lipoxygenase-1,15-LOX-1)mRNA及蛋白在胃癌及癌旁正常组织中的表达,并研究两者间的关系.方法 采用RT-PCR和western blot检测胃癌组织及相匹配的癌旁正常组织中5-LOX、15-LOX-1 mRNA和蛋白的表达.结果 5-LOX mRNA及蛋白在胃癌组织中的表达均显著高于癌旁正常组织(P＜0.05),而15-LOX-1 mRNA及蛋白在胃癌组织中的表达均显著低于癌旁正常组织(P＜0.05).5-LOX与15-LOX-1在胃癌组织中的表达无明显相关(P＞0.05).结论 胃癌组织中存在5-LOX和15-LOX-1的表达失衡,且可能与胃癌的发生发展有关,但二者之间无相关性.

摘要:

目的 探讨超声内镜指导下内镜微创治疗上消化道黏膜下肿瘤的应用价值.方法 对内镜发现的154例上消化道黏膜下肿瘤患者根据超声内镜检查结果选择不同内镜微创治疗方案,术后常规行病理学及免疫组化检查,定期内镜随访.结果 154例采用内镜微创治疗,其中皮圈套扎术83例、高频电凝电切37例、内镜黏膜切除术26例、内镜黏膜下剥离术8例.除1例因出血中转手术外,其余均成功切除病灶,无严重出血、穿孔等并发症.超声内镜诊断与术后病理性质符合率为92.8％,来源层次符合率90.6％.113例内镜术后随访1～24个月,未见复发.结论 在超声内镜指导下选择不同方法进行内镜下切除黏膜下肿瘤是一种安全、有效的微创治疗手段.

摘要:

目的：观察胶原、基质金属蛋白酶13（Matrix metalloproteinase 13，MMP13）及其抑制物基质金属蛋白酶抑制物-1（Tissue inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP1）在猪血清诱导的肝纤维化大鼠肝组织中的表达及大鼠白介素10（rat inter-leukin-10， rIL-10）基因干预的影响，探讨rIL-10基因抗肝纤维化的作用机制。方法：30只清洁级SD大鼠随机分为正常对照组（C组）和纤维化模型组。 C组每周腹腔注射2次生理盐水，每次0．5 ml，共8周；纤维化模型组每周腹腔注射2次猪血清，每次0．5 ml，共8周。至造模第5周开始模型组随机分为纤维化组（M组），rIL-10基因干预组（I组）及空质粒对照组（P组）。 C组和M组大鼠尾静脉注射林格氏液作为试剂对照，I组大鼠尾静脉注射rIL-10质粒pcDNA3-rIL-10， P组大鼠尾静脉注射pcD-NA3空质粒，每周1次。于第8周末处死所有大鼠。天狼猩红染色检测各实验组大鼠肝组织胶原沉积情况，S-P免疫组化检测各组大鼠肝脏MMP13及TIMP1表达的情况。结果：天狼猩红染色显示：与C组比较，猪血清诱导的肝纤维化模型M组及空质粒对照P组大鼠肝组织中胶原沉积面积显著增多（P＜0．01）；与M组和P组比较，rIL-10基因干预I组大鼠肝组织中胶原的沉积面积显著减少（ P＜0．01）；免疫组织化学染色结果显示：与C组比较，猪血清诱导的肝纤维化模型M组及空质粒对照P组大鼠肝组织中MMP13及TIMP1表达明显增强（P＜0．01），I组纤维化大鼠肝组织中MMP13表达上调而TIMP1表达显著减少（P＜0．01），与M组和P组比较，I组纤维化大鼠肝组织中MMP13及TIMP1表达显著减少（P＜0．01）。结论：rIL-10基因抑制肝纤维化大鼠肝脏胶原沉积与其抑制基质金属蛋白酶抑制物TIMP1的表达相关。

摘要:

目的 探讨大鼠白介素10(rIL-10)基因是否可通过半乳糖配体介导的脂质体转染法在大鼠肝脏内靶向表达.方法 将已构建好的rIL-10基因真核表达质粒与半乳糖配体转染试剂按jetPEI-Gal/DNA (N/P=10)比例混合,通过尾静脉注射转移至大鼠体内.RT-PCR法和ELISA法检测rIL-10基因转移至体内0 h、24 h、7 d和16 d后大鼠肝、肾、脾和肺组织及血清中rIL-10的表达情况.结果 rIL-10基因转移前大鼠肝、肾、脾和肺组织末扩增出明显rIL-10 mRNA表达,转移7 d后rIL-10表达主要分布在肝组织.肝组织中rIL-10 mRNA表达在基因转移24 h和7 d时显著升高.血清中的rIL-10浓度在转移后24 h和7 d浓度分别为(107.92±12.26) pg/ml和(33.2±13.15) pg/ml.结论 rIL-10基因通过半乳糖配体介导的脂质体转染法可有效的转移至大鼠体内,并可在肝脏靶向表达一周左右时间.

摘要:

目的:建立稳定表达分泌型大鼠白细胞介素10(rIL-10)基因的正常大鼠肝细胞系(BRL细胞),为研究IL-10抗纤维化的基因治疗打下基础.方法:通过RT-巢式PCR技术从大鼠外周血单核细胞(PBMC)中扩增出rIL-10全长基因,克隆入pcDNA3真核表达载体构建重组表达载体pcDNA3-rIL-10.鉴定正确后,用受体介导的脂质体转染试剂将pcDNA3-rIL-10转染BRL细胞,高浓度G418筛选,RT-PCR及ELISA法证实rIL-10在BRL细胞中的稳定表达.结果:构建的真核表达载体pcDNA3-rIL-10经质粒双酶切及测序鉴定证实载体构建的正确性.RT-PCR及ELISA法检测出经G418筛选的BRL细胞稳定表达IL-10.结论:成功构建分泌型pcDNA3-rIL-10真核表达质粒及筛选出稳定表达分泌型rIL-10的BRL细胞株,为进一步研究IL-10抗纤维化的基因治疗打下基础.

摘要:

目的:探讨一氧化氮(NO)和半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)在多巴胺诱导PC12细胞凋亡中的可能作用.方法:流式细胞仪定量检测PC12细胞的凋亡率,原位末端标记法(TUNEL)观察凋亡细胞的形态,Griess法测定NO-2的浓度,荧光分光光度计法检测caspase-3的活力,半定量RT-PCR法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达水平.结果:多巴胺(0.15-0.60 mmol/L)可剂量依赖性地诱导PC12细胞凋亡,表现为凋亡细胞的TUNEL 染色阳性;iNOS mRNA 的表达、NO的合成及caspase-3的活力均有明显的增加(P＜0.01);特异性的iNOS抑制剂aminoguanidine和caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO 通过减少NO的生成和抑制caspase-3的激活阻断PC12细胞凋亡.结论:NO的生成可能是多巴胺诱导PC12细胞凋亡的触发因子,caspase-3的激活是其中的效应因子.