摘要:

目的 探讨中药丹参主要活性成分丹酚酸B (Sal B)对人牙周膜细胞(hPDLCs)成骨分化的影响.方法 取第3代hPDLCs进行实验,运用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测不同浓度丹酚酸B对hPDLCs增殖活性影响,通过检测碱性磷酸酶(ALP)活性、矿化结节染色、骨钙素(OCN) mRNA表达来探讨丹酚酸B对hPDLCs成骨分化的影响.结果 丹酚酸B对hPDLCs增殖活性无影响.当丹酚酸B浓度为0.5、1、5μmol·L-1时均能增加hPDLCs的ALP活性和OCN mRNA表达,与OIM组比较差异有统计学意义(P＜0.05);且当丹酚酸B浓度为0.5、1、5μmol·L-1时hPDLCs形成矿化结节数量明显高于OIM组.结论 适宜浓度的丹酚酸B能有效促进hPDLCs成骨分化.

摘要:

目的 探讨犬上颌窦黏膜干细胞的成骨性能.方法 取健康Beagle犬上颌窦黏膜,免疫磁珠法分选CD146阳性细胞,培养犬上颌窦黏膜干细胞.流式细胞术检测一代细胞的表面抗原CD146和CD44、CD34.犬上颌窦黏膜干细胞经基础培养(基础培养组)和成骨诱导培养(成骨诱导组)后,应用Real-time PCR、免疫组化法检测2组成骨相关基因mRNA和蛋白的表达,应用ALP测试盒检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,应用茜素红染色、Von KOSSA染色观察成骨诱导后矿化结节的形成.结果 成功培养犬上颌窦黏膜干细胞,流式细胞术检测显示CD146和CD44阳性、CD34阴性.成骨诱导组犬上颌窦黏膜干细胞Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)(t=14.44,P<0.001)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)(t=7.85,P=0.001)和ALP mRNA(t=14.27,P<0.001)表达量明显高于基础培养组,差异均有统计学意义;成骨诱导组RUNX2和OPN蛋白表达水平增强.犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导后,与基础培养组相比,ALP活性增高,3 d(t=8.79,P<0.001)、7 d(t=9.75,P<0.001)、14 d(t=12.14,P<0.001)、21 d(t=19.62,P<0.001)、28 d(t=17.53,P<0.001)时,成骨诱导组明显高于基础培养组;犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导后茜素红和Von KOSSA染色可见到明显的矿化结节.结论 犬上颌窦黏膜干细胞具有成骨能力.

摘要:

目的 探讨miR-21对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)增殖及成骨的影响,旨在为干细胞治疗牙周炎提供实验基础.方法 酶解组织块法分离培养hPDLSCs,通过流式细胞仪检测表面分子CD34、CD45、CD90、CD105对hPDLSCs进行鉴定,采用Lipofectamine 2000将miR-21的mimics(pre-miR-21)、inhibitor(anti-miR-21)以及各自的阴性对照转染至hPDLSCs.实验分组:过表达组(mimics组)、过表达阴性对照组(mimics-NC组);抑制阴性对照组(inhibitor-NC组)、抑制组(inhibitor组).实时荧光定量PCR检测miR-21转染效率;CCK-8、流式细胞术检测hPDLSCs的增殖;茜素红染色检测hPDLSCs的成骨能力和Western blot检测成骨相关基因Runx2的蛋白表达.结果 miR-21的mRNA表达量mimics组较mimics-NC组明显升高,inhibitor组较inhibitor-NC组明显降低(P<0.05).hPDLSCs增殖及S期细胞比例mimics组较mimics-NC组升高,inhibitor组较inhibitor-NC组减少,差异有统计学意义(P<0.05).经茜素红染色后,mimics组矿化结节多于mimics-NC组;inhibitor组矿化结节少于inhibitor-NC组;Western blot检测mimics组Runx2蛋白表达高于mimics-NC组,inhibitor组Runx2蛋白表达量较inhibitor-NC组减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-21调控hPDLSCs的增殖和成骨向分化.

摘要:

目的 比较骨髓间充质细胞在聚醚醚酮(polyetheretherketone,PEEK)和纯钛(titanium,Ti)表面的体外生物相容性.方法 制备厚度为1 mm,直径为10 mm的圆片状PEEK片和Ti片.将PEEK片和Ti片分别与SD乳鼠的骨髓间充质细胞在体外复合并定向成骨诱导培养,采用扫描电镜观察细胞黏附形态、Alamarblue检测细胞黏附与增殖能力、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性及茜素红染色的矿化结节半定量等方法检测成骨分化能力,对比骨髓间充质细胞在PEEK片和Ti片表面的细胞黏附、增殖及成骨分化的能力.结果 ①观察骨髓间充质细胞在PEEK片和Ti片表面培养1 h、4 h、24 h时的细胞形态无明显差异;②骨髓间充质细胞接种于PEEK片和Ti片表面培养的1 h、3 h、1 d、3 d,PEEK组的活细胞数均高于Ti组(P＜0.05);③在骨髓间充质细胞接种于PEEK片和Ti片表面并成骨诱导矿化培养后的7 d、14 d,PEEK组的细胞ALP活性均高于Ti组的细胞ALP活性(P＜0.05);④成骨诱导的骨髓间充质细胞在PEEK片和Ti片表面接种培养后的7 d、14 d,经茜素红染色后半定量分析,PEEK组的矿化程度高于Ti组(P＜0.05).结论 PEEK具有优于Ti的体外生物相容性,能更好地促进骨髓间充质细胞的黏附、增殖及成骨分化能力,有望成为牙种植体新材料.

摘要:

背景:因糖尿病条件下骨质代谢存在紊乱,对这类骨缺损的修复具有挑战性,研究糖尿病环境下脂肪干细胞的成骨特性将为其在特定环境下的应用提供理论基础.目的:观察高糖、糖基化终末产物对人脂肪干细胞成骨分化能力的影响.方法:选取27.5 mmol/L高糖、100 mg/L糖基化终末产物体外模拟糖尿病环境,干预人脂肪干细胞成骨分化;实验分为4组,每组设立6个样本.通过荧光染色检测脂肪干细胞诱导成骨21 d时的Ⅰ型胶原表达量,矿化结节染色观测各组中等量脂肪干细胞在14,21,28 d时矿化结节形成的数量.结果与结论:21 d时,高糖联合糖基化终末产物组中Ⅰ型胶原荧光强度较正常组低2.76倍;5个视野下脂肪干细胞平均矿化结节数量与正常组、单纯高糖组、单纯糖基化终末产物组相比明显下降,差异有显著性意义(P < 0.01).高糖及糖基化终末产物会抑制脂肪干细胞向成骨方向的同源分化,提示糖尿病环境下,高糖与糖基化终末产物的存在是导致脂肪干细胞成骨分化能力下降的不利因素.

摘要:

目的 通过动物实验于体外条件下观察补肾中药对大鼠骨髓基质干细胞增殖分化的影响.方法将不同浓度的补肾中药方剂与骨髓基质干细胞体外共同培养,测定细胞增殖功能,检测成骨细胞增殖与分化指标(包括碱性磷酸酶、矿化结节).结果与空白组比较,浓度100 mg/L、200 mg/L的补肾中药在不同时间段均可提高骨髓基质干细胞增殖率(P < 0.05);与空白组比较,浓度20 mg/L、40 mg/L、100 mg/L、200 mg/L的补肾中药可使ALP活性增强、矿化结节数量增多(P < 0.05).结论较高浓度的补肾中药能促进骨髓基质干细胞的成骨潜能.

摘要:

背景：以往研究用来诱导成牙本质细胞分化的培养基普遍借鉴成骨细胞的诱导浓度，其他浓度的诱导情况尚无相关研究。目的：观察在低浓度β-甘油磷酸钠条件培养下，牙髓干细胞向成牙本质细胞分化过程中，牙本质基质蛋白1、牙本质涎蛋白和细胞外基质磷酸糖蛋白的表达情况。方法：分离培养人牙髓干细胞，用不同浓度的诱导液诱导牙髓干细胞分别向脂肪细胞，成骨细胞分化，证实其多向分化能力。用5 mmol/Lβ-甘油磷酸钠诱导培养牙髓干细胞向牙本质细胞分化，分别在培养第7，14，21，28天提取各组细胞RNA，反转录PCR检测牙本质基质蛋白1、牙本质涎蛋白和细胞外基质磷酸糖蛋白的表达情况；诱导牙髓干细胞向成牙本质细胞分化形成的矿化结节用Alizarin Red S法检测。结果与结论：人牙髓干细胞经过诱导可证实其成功分化为脂肪细胞和成骨细胞；反转录 PCR 结果显示，5 mmol/Lβ-甘油磷酸钠培养牙髓干细胞在培养7，14，21 d，各组细胞牙本质基质蛋白1、牙本质涎蛋白的mRNA表达增加，伴随细胞外基质磷酸糖蛋白表达下调；培养至28 d，行矿化结节检测发现牙髓干细胞向成牙本质细胞成功矿化，可见红染的矿化结节。结果证实，5 mmol/Lβ-甘油磷酸钠诱导培养的牙髓干细胞可成功分化为成牙本质细胞，并下调细胞外基质磷酸糖蛋白mRNA的表达，同时上调牙本质基质蛋白1及牙本质涎蛋白mRNA的表达。

摘要:

背景:葛根素提取自豆科植物野葛的根部,根据其化学结构可归类为异黄酮类化合物,据报道异黄酮具有促进成骨细胞增殖分化功能.目的:观察不同浓度葛根素对β-磷酸三钙成骨细胞复合物的影响,探讨葛根素对体内成骨作用的影响.方法:①取新生兔颅盖骨进行成骨细胞培养,应用碱性磷酸酶试剂盒及茜素红染色方法观察不同浓度葛根素对体外培养成骨细胞碱性磷酸酶活性及矿化结节形成影响;②选促进成骨细胞活性最佳浓度葛根素组作为A组,无葛根素培养的细胞为B组,2组培养的成骨细胞复合于β-磷酸三钙,使用MTT法检测支架材料中成骨细胞活性;③将2组细胞支架复合物植入兔背阔肌中,通过组织学方法分析葛根素在体内对新骨生成的作用.结果与结论:葛根素可提高成骨细胞碱性磷酸酶活性及矿化结节形成数量,1×10-6 mol/L葛根素能明显提高支架材料中成骨细胞活性,将1×10-6 mol/L葛根素干预的细胞制成的细胞支架复合物植入兔背阔肌后,新骨生成量明显增加.提示葛根素具有促进 β-磷酸三钙成骨细胞复合物体内新骨生成作用,可作为促进成骨治疗的选择药物.

摘要:

目的 探讨miR-214对于牙囊细胞(dental follicle cells,DFCs)成骨分化的影响.方法 双向差速传代法体外培养提纯牙囊细胞,以未转染的DFCs为对照(DFCs组),通过向DFCs中转染miR-214-3p mimics(miR-214 mimics组)或miR-214-3p inhibitor(miR-214 inhibitor组)分别上调和下调DFCs中的miR-214的表达.成骨诱导7 d,qRT-PCR检测miR-214表达及相关成骨基因碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨粘连蛋白(os-teonectin,OSN)、成骨相关转录因子2(runt-related transcription factor-2,RUNX-2)的mRNA表达,免疫蛋白印迹检测各组RUNX-2、β-catenin蛋白表达;成骨诱导14 d茜素红染色观察矿化结节形成的情况.结果 骨诱导7 d,相较DFCs组,miR-214 mimics组miR-214的表达上调,miR-214 mimics组成骨相关基因ALP、OSN及RUNX-2的mRNA表达均低于DFCs组,但仅ALP在两组的差异具有统计学意义(P＞0.05),而miR-214 inhibitor组成骨相关基因ALP、OSN、RUNX-2的mRNA表达均高于DFCs组,且差异均具有统计学意义(P＜0.05).miR-214 mimics组RUNX-2、β-catenin的蛋白表达均低于miR-214 inhibitor组.miR-214 mimics组钙化结节明显少于DF-Cs组,而miR-214 inhibitor组钙化结节却明显多于DFCs组.结论 miR-214上调可使β-catenin表达下调,并抑制成骨相关基因ALP、OSN及RUNX-2的表达,抑制成骨分化;下调miR-214,结果相反;miR-214可能是通过下调β-catenin的表达,抑制DFCs的成骨分化.

摘要:

无菌采取5日龄SD大鼠的颅盖骨,用胰蛋白酶预消化后,漂洗,剪碎,再用Ⅱ型胶原酶消化获得成骨细胞.通过倒置相差显微镜观察,并用碱性磷酸酶和矿化结节染色鉴定,利用微量滴定(MTT)法测定一个培养周期的成骨细胞活性分布,探讨一种经济、高效的原代成骨细胞培养方法.倒置相差显微镜形态观察结果显示,未贴壁的细胞呈圆形,贴壁生长的细胞呈不规则梭形、三角形或多角形,单核,有1～3个核仁;碱性磷酸酶和钙化结节染色均呈阳性(阳性率≥98.06%);MTT法结合形态学观察结果显示,成骨细胞培养至第10 d时活性最强.证实用改良的二次酶消化法能够在短时间内获得大量成骨细胞,且所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态和功能.