摘要:

目的 探讨亚低温(MHT)对大鼠颅脑创伤(TBI)后海马齿状回区(DG)新生神经元长期存活及成熟的影响.方法 59只健康成年SD大鼠随机分为假手术(sham)组、TBI组及TBI+MHT组,sham组15只,其余两组各22只.TBI大鼠模型借助液压冲击脑损伤仪建立,打击压力设置为2.0 atm(1 atm=101.325 kPa).TBI+MHT组大鼠在损伤后立即接受MHT,降温后直肠目标温度为33.5℃,维持4 h,并于1.5 h内缓慢复温至37℃.在不同时间点应用Morris水迷宫试验,mNSS评分比较大鼠神经功能恢复情况,免疫荧光染色等方法检测各组海马新生神经元长期存活及成熟情况.结果 与TBI组比较,TBI+MHT组大鼠伤后4周的逃避潜伏期明显缩短,平台穿越次数及目标象限停留时间均显著增加(P<0.05).损伤后1、2、4周TBI+MHT组大鼠较TBI组mNSS评分均降低(P<0.01).与sham组比较,损伤后1、4、8周TBI组和TBI+MHT组大鼠损伤侧海马DG区BrdU阳性细胞数及BrdU/NeuN双阳性细胞数均增加(P<0.05),且TBI+MHT组较TBI组增加更明显(P<0.05).此外,与损伤后1周相比,损伤后4周及8周TBI组BrdU/NeuN双阳性细胞数减少,而TBI+MHT组进一步增加(P<0.05).结论 MHT可促进TBI后新生神经元的长期存活及成熟,促进TBI后神经功能恢复.

摘要:

目的 探讨Shh信号通路对大脑皮质反应性星形胶质细胞(RAS)获得神经干细胞潜能的影响.方法 体外原代培养SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞,以肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1α和C1q三种因子诱导炎症型RAS,划痕实验制备创伤型RAS,使用免疫荧光染色法观察细胞形态及纯度.实验分为普通星形胶质细胞组(对照组)、炎症组、划痕组(创伤组).炎症组培养至干预后24 h,对照组和划痕组培养至第5天进行免疫荧光染色观察巢蛋白(Nestin)阳性细胞,运用Western blot技术检测不同损伤模型的细胞中Shh蛋白的表达量.之后各组细胞培养至第7天更换神经干细胞培养基,将前述3组各自再分为激活组(各组细胞更换神经干细胞培养基后添加Shh激活剂SAG)和抑制组(各组细胞更换神经干细胞培养基后添加Shh抑制剂环巴胺)两个亚组,培养14 d后采用qRT-PCR检测各亚组RAS源性神经干细胞相关基因的表达量.结果 细胞损伤模型中,免疫荧光染色证明各组细胞中划痕组Nestin阳性细胞明显多于炎症组和对照组.Western blot结果显示2组损伤细胞中划痕组Shh蛋白表达量高于炎症组(P<0.05).更换神经干细胞培养基后,激活组中2组损伤细胞的干细胞相关基因Nestin、Pax-6、Sox-2、Oct-4和Map-2的表达水平均有所升高,其中由划痕诱导的RAS神经干细胞相关基因Nestin、Pax-6、Sox-2、Oct-4和Map-2的表达水平高于炎症诱导的RAS神经干细胞和普通星形胶质细胞(P<0.01);添加Shh抑制剂后,3组上述基因表达量皆明显降低,但划痕组的表达量仍高于其他2组(P<0.01).结论 在体外,Shh信号通路可以介导损伤后大脑皮质RAS获得干细胞潜能.