摘要:

以兰考泡桐组织培养苗叶片为材料,分别采用CTAB-Ⅰ、CTAB-Ⅱ、SDS-Ⅰ、SDS-Ⅱ四种方法提取叶片DNA,并对不同提取结果进行紫外分光光度、电泳、酶切、RAPD等方法的鉴定.结果表明,用四种方法提取的泡桐叶片DNA得率约为3.5-5.2μg/10mg ,A260/A280约为1.7-1.8,A260/A230在2.0以上,分子量在23Kb以上,能够被EcoRⅠ、HindⅢ酶切,能够进行RAPD分析.综合考虑得率、纯度、质量等因素,以SDS-Ⅰ法为最佳方案.

摘要:

目的:选择一种高效、简便快速、价格合适的从全血中提取基因组DNA的方法.方法:分别采用3种不同的方法从全血中提取基因组DNA,比较了3种方法提取的DNA的质量,以及各种方法所需时间及其费用.对其中的一种方法进行了改良.结果:3种方法提取的DNA的质量都能达到相关分子生物学实验的要求,但在操作程序、价格等方面存在差别.结论:Genomix法操作简单、快速、灵活性好、价格便宜,适合于大样本的DNA提取.

摘要:

以新郑灰枣苗叶片为材料,采用 CTAB 方法提取叶片 DNA,并对该方法进行改良.比较4种 DNA 提取方式,对提取结果进行紫外分光光度、电泳、酶切等方法的鉴定,结果表明,提取的灰枣叶片 DNA 得率约为0.370～0.530μg/mg,A260/A280约为1.90～2.00,A260/A230在2.00以上,分子量在23 kb以上,能够被 EcoRⅠ,HindⅢ酶切.其中,第2种处理方法提取效果较好.

摘要:

分别采用3种方法提取了豫杂一号泡桐组培苗叶片DNA,并对其得率和质量进行了检测.结果表明,DNAkit,CTAB-Ⅰ和CTAB-ⅡI法提取DNA的得率分别为0.250,0.284,0.312 mg·g~(-1);CTAB法提取的DNA片段大于DNA kit法;利用CTAB-Ⅱ法得到的DNA可被EcoRI,MspⅠ和Hpa Ⅱ完全酶切,该DNA经AFLP-PCR扩增电泳后,产物带型清晰,稳定,重复性好.CTAB-Ⅱ法为泡桐DNA提取的最佳方法.

摘要:

本研究首先通过拮抗实验对5个不同来源供试杏鲍菇栽培菌株进行初步分类,进而采用RF-RAPD技术对供试菌株进行分析.结果显示,RF-RAPD分析结果与拮抗实验结果相一致,并且由于RF-RAPD同时采用了RFLP和RAPD两种分子标记,可更好地区分亲缘关系较近的香杏PL-3和京杏PL-10间的差异.由此可见,RF-RAPD是一种快速、准确鉴定杏鲍菇的新方法,可用于食用菌品种分类与鉴定.

摘要:

为建立检测肾综合征出血热（HFRS）患者血清中汉坦病毒（HV）基因的RT-nested PCR方法，并进一步进行限制性酶切分型，设计并合成互补于HV S基因片段的引物，对78例HFRS患者血清进行RT-nested PCR检测，并对PCR产物进行酶切分析。结果显示，阳性率分别为76%(≤7天)、 67% (8～14天)、43%(15～21天)和29%(>21天)。48例检测阳性患者PCR产物酶切分型，47例为Ⅰ型，1例为Ⅱ型。提示RT-nested PCR用于早期HFRS患者的HV基因检测，具有直接、敏感、特异等优点，其产物的限制性酶切分型能快速准确地区分国内当前流行的主要HV毒株型别。

摘要:

目的评价菌落PCR法鉴定噬菌体抗体库阳性重组率的可靠性. 方法鼠抗体基因Lc片段、Fd片段经酶切、纯化后,依次克隆入pComb3载体上相应的酶切位点,电转化XL1-blue菌后建立鼠源性Fab噬菌体抗体库.比较菌落PCR法、质粒PCR法及质粒酶切法鉴定转化菌阳性重组率的一致性.同时用空菌、空载体、空载体菌等作模板为对照PCR,以排除相关组分的干扰. 结果建立的Lc库的库容为1.175×106CFU, Fab库的库容为1.02×106CFU.3种方法鉴定的阳性重组率不同(Lc的重组率依次为100%、78%、78%,Fd的重组率依次为90%、66%、66%,Lc与Fd同时插入的重组率依次为90%、50%、50%).菌落PCR法鉴定的重组率偏高,存在假阳性现象.对照PCR提示,XL1-blue菌本身可能是导致假阳性扩增的原因. 结论用菌落PCR法不能准确鉴定噬菌体抗体库的重组率,用质粒PCR法或质粒酶切法鉴定更为可靠.

摘要:

根据日本鳗、欧洲鳗和美洲鳗3种鳗鱼的16S rRNA基因序列,设计特异性引物,进行16SrRNA基因的PCR扩增,然后对PCR产物进行Apa I酶切反应.结果显示,日本鳗和欧洲鳗的PCR产物均出现211 bp的特异性扩增条带,美洲鳗的PCR产物出现两条DNA条带;日本鳗的PCR产物经Apa I酶切产生大小为135bp和76 bp的两条条带,而欧洲鳗的PCR产物经Apa I酶切没有变化.因此,利用该方法可鉴别出日本鳗、欧洲鳗和美洲鳗等3种鳗鱼.

摘要:

提取介质中加入2.5% β-巯基乙醇, 能有效去除次生物质对木麻黄基因组DNA提取的影响.用新建方法所提DNA产率比用前人方法提的高出0.8倍左右.鉴定结果表明:鲜小枝、干小枝的DNA样品皆为48kb左右,适于限制性酶切和RAPD反应; 同时发现同一株树的鲜小枝、干小枝,基因组DNA RAPD扩增可得到相同的产物.

摘要:

目的 对历年从江苏省不同地区分离的肠出血性大肠埃希菌O157(以下简称:O157)进行分型分析.方法 采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法对108株O157分子分型,比较不同地区、不同年份菌型差异.结果 根据EcoRV限制性酶切图谱可将菌株分成JS01-JS10十个不同的型别.主要菌型JS01占64.9％,JS02型与JS01型菌株酶切图谱相似度很高,JS03和JS04型菌株数目较少(12株),但近一半属于人源菌株.从时间方面看,1999年分离的菌型最多；从地区方面看,铜山县分离到的菌株型别最为多样化.结论 不同菌型之间的致病性存在差异,菌株与地理来源的关系密切.PCR-RFLP方法操作简便、重复性好,为O157的流行病学研究提供了一条全新途径.