摘要:

目的 利用化学激活的技术,建立小鼠孤雌胚胎干细胞系.方法 用钙离子载体A23187和6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)处理小鼠卵母细胞,待囊胚形成后,分离内细胞团,细胞传代、扩增.待传至37代时,核型检测查染色体,用微卫星技术进行纯合性鉴定,用免疫荧光技术检测胚胎干细胞表面标记Oct-4、SSEA-1及SSEA-4的表达情况,并用畸胎瘤试验检测其多向分化能力.结果 该细胞株为孤雌来源,表现为正常二倍体核型,表达ALK,表面标志物Oct-4、SSEA-1阳性,SSEA-4阴性.体内注射后,在局部形成含三个胚层组织的畸胎瘤.结论 通过钙离子载体A23187和6-DMAP化学激活小鼠卵母细胞,可以得到具有胚胎干细胞特性的细胞株.

摘要:

比较了细胞松弛素B(CB)和6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)通过抑制受精卵极体释放的方法批量诱导三倍体长牡蛎的养殖效果.长牡蛎卵子在25℃的海水中受精,20～30min后,开始用浓度为0.5mg@L-1的CB处理,持续18～22min,受精卵处理密度为4.0～4.5×107个@L-1,三倍体产率为65.2%～70.1%,面盘幼虫孵化率为12.3%～14.5%,诱导效率指数为0.09.6-DMAP的使用浓度为400～420μmol@L-1,受精卵处理密度为3.0～3.5×107个@L-1,授精水温、处理起始和持续时间等与CB方法相同,三倍体产率为58.7%～65.4%,面盘幼虫孵化率为52.1%～55.4%,诱导效率指数为0.32.两种方法的采苗率基本相同,采苗器为基质较硬的栉孔扇贝贝壳.海区养殖采用浮筏夹苗吊养技术,两种方法诱导的三倍体牡蛎养殖性状没有明显差别.通过比较CB和6-DMAP两种诱导方法及三倍体的养殖效果表明,后者具有更好的应用性.

摘要:

分别在受精后15和30min,用60mg·L-16-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)处理栉孔扇贝(♀)×虾夷扇贝(♂)受精卵诱导异源三倍体,持续处理5～25min.采用二氨基苯基吲哚(DAPI)染色和荧光显徽镜观察对处理前后受精卵的染色体行为变化进行了研究,空气干燥法制备染色体检测胚胎倍性.结果表明,无论抑制第一极体或是第二极体释放均能获得正常发育的异源三倍体胚胎;抑制第一极体释放,产生异源三倍体、非整倍体,延长处理时间能获得五倍体;抑制第二极体释放,产生异源三倍体;6-DMAP使染色体运动终止,处理前后,核相无变化,随着处理时间的延长,核相泡状化增强.

摘要:

当50%九孔鲍受精卵出现第一极体后,以6-DMAP为诱导剂,用不同的浓度和不同的持续时间抑制第二极体的释放诱导三倍体;并进行了生产性苗种培育和养成试验.结果表明,6-DMAP的诱导浓度为300μmol@dm-3、诱导持续时间为10min时,其胚胎的三倍体率为90%以上,并且胚胎的孵化率高达85%,幼体的畸形率较低,为50%～55%;经过7个月培育,试验组养成鲍的三倍体率为65%以上;试验组养成鲍的平均壳长比对照组增长10%,平均体重比对照组增重30%.与二倍体鲍相比较,三倍体鲍在壳长增长和体重增重等方面,显示了显著的优势[t>t0.01(58)].

摘要:

从三倍体率、D幼孵化率、幼虫生长速度、生产成本等方面比较了细胞松驰素B、二甲基氨基嘌呤、咖啡因三种化学诱导剂诱导太平洋牡蛎产生三倍体的效果.CB的三倍诱导率最高,为91.5%,但D幼孵化率最低,仅为5.8%,且成本最高,为6-DMAP和咖啡因的4倍和50倍.6-DMAP的三倍体诱导率略低于CB,为88.0%,但 D幼孵化率最高,为60.5%,其成本仅为CB的1/4.咖啡因的三倍体诱导率最低,为82.4%,幼虫孵化率为30.2%,但其成本最低,仅为CB的2%和6-DMAP的8%.三种诱导剂诱导的三倍体群幼虫在生长速度及成活率方面无显著差别.

摘要:

比较3种化学激活方法和4种电-化学激活方法对牛体外成熟卵母细胞进行孤雌激活的效果.结果显示,单独用离子霉素和用离子霉素+6-DMAP+CB或+CHX+CB激活牛卵母细胞,两者之间差异极显著(P<0.01);用不同强度电脉冲+6-DMAP+CB激活牛卵母细胞,各组间卵裂率差异均不显著(P>0.05).结果表明,虽然电-化学激活方法最高可获得82.9%的卵裂率,比化学激活方法中最好的高4.8%,但后者不需电融合仪,操作相对简便.

摘要:

用6-二甲基氨基嘌呤处理栉孔扇贝♀×虾夷扇贝♂受精卵,抑制第二极体释放诱导异源三倍体.水温17 ℃下,分别进行了不同起始处理时间(受精后20～40 min)、不同药物处理浓度(40～80 mg/L)和不同持续处理时间(5～20 min)的实验.起始处理时间实验以受精后35 min开始处理效果最好,三倍体率为51.8%,D形幼虫成活率可达78%;药物处理浓度和持续处理时间最佳组合为60～70 mg/L 6-DMAP处理20 min,三倍体率可达59.65%,D形幼虫成活率为22.05%.综合考虑,诱导扇贝异源三倍体的适宜参数为:当50%受精卵排出第一极体时,以60～70 mg/L 6-DMAP处理20 min.

摘要:

目的：探寻一种稳定有效的卵母细胞激活方法，为兔体细胞核移植提供实验基础。方法：兔超排后获得卵母细胞体外成熟22～24 h，经脱颗粒处理后采用不同激活剂和不同处理时间进行激活，体外培养5～7 d，观察胚胎发育与囊胚形成情况。结果：卵母细胞经过离子霉素作用5 min或者乙醇作用7 min均能被激活，但两者卵裂率、囊胚率都较低；乙醇和离子霉素分别与6-DMAP联合激活兔卵母细胞时，离子霉素＋6-DMAP 处理组卵裂率（73．7％）显著高于乙醇＋6-DMAP处理组（38．5％，P＜0．05）；与离子霉素联合激活时，2．0 mmol/L的6-DMAP处理5．0 h时的卵裂率和囊胚率最高，达75．6％和45．5％。结论：激活方法对兔卵母细胞孤雌激活率的影响很大，不同激活剂的联合应用及激活剂的作用时间对兔卵母细胞的激活存在显著差异。