摘要:

目的:探讨IL-6R Mrna特异反义寡核苷酸(ASON)在体外对骨吸收的影响及意义.方法:采用器官培养法培养新生的小鼠颅盖骨,并分别用ASON、无义寡核苷酸(NSO)、IL-6或ASON与IL-6联合处理颅盖骨,未加药组为对照.培养一定时间后,测定培养上清液的钙含量,将实验组钙含量与对照组钙含量比值作骨吸收指数.结果:作用48h后,不同剂量的ASON均可轻度降低骨吸收指数,但无剂量依赖关系,ASON(5μmol/L)对正常培养的颅盖骨的骨吸收的抑制率为8.6%;用IL-6培养颅盖骨使骨吸收指数呈剂量依赖关系升高,ASON(5.0μmol/L)可能明显抑制由IL-6(40μg/L)引起的高骨吸收指数,其抑制率为58.0%;NSO对骨吸收指数无影响.ASON(5.0 μmol/L)分别作用12、24、48 h的骨吸收指数则随时间延长而降低.结论: ASON阻断IL-6R表达后明显抑制IL-6刺激所致的新生小鼠颅盖骨骨吸收,而对正常培养的颅盖骨骨吸收抑制作用较弱.

摘要:

目的:分析不同类型原代白血病细胞IL-6R基因及IL-6R蛋白的表达情况.方法:采用RT-PCR方法对取自29例白血病患者的原代白血病细胞和8例健康人外周血单个核细胞的IL-6R基因表达情况进行了分析,并应用原位杂交技术和免疫组织化学方法对细胞表面的IL-6受体蛋白进行了检测.结果:20例急性髓细胞白血病均明显表达IL-6R mRNA;9例急性淋巴细胞白血病中有2例为阳性,其余7例为阴性;8例正常人PBMC中6例阴性,2例有弱表达.免疫组化和原位杂交结果与RT-PCR实验结果相一致.结论:IL-6R可作为急性髓系白血病免疫治疗的候选靶位点.

摘要:

目的:探讨Th2型细胞因子受体(IL-4R、IL-6R、IL-10R)在系统性红斑狼疮(SLE)发病机制中的作用及其临床意义.方法:应用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测89例SLE患者和30例正常人外周血单核细胞(PBMC)中IL-4R、IL-6R和IL-10R mRNA的表达水平;用ELISA法检测血清中IL-4、IL-6和IL-10水平.结果:①活动期SLE患者和非活动期SLE患者及正常人Th2型细胞因子受体阳性表达率为100%.②PBMC中,IL-4R mRNA表达水平:活动期SLE患者(1组)为0.604±0.147,非活动期SLE患者(2组)为0.40±0.13,正常人(3组)为0.37±0.07;IL-6R mRNA表达水平:1组为0.90±0.27,2组为0.52±0.11,3组为0.57±0.24;IL-10R mRNA表达水平:1组为0.87±0.29,2组为0.72±0.21,3组为0.68±0.14.1组和2组间比较无显著性差异(P＜0.05),1组和3组间比较有显著性差异(P=0.00),2组和3组间比较无显著性差异(P＞0.05).③血清中IL-4、IL-6和IL-10水平:1组显著高于2组和3组(P＜0.05),2组显著高于3组(P＜0.05).活动期SLE患者和非活动期SLE患者血清中的IL-4水平与PBMC上的IL-4R的表达水平呈正相关(r=0.622和r=0.859,P＜0.05).活动期SLE患者和非活动期SLE患者血清中的IL-6水平与PBMC上的IL-6R的表达水平呈正相关(r=0.887和r=0.615,P＜0.05).活动期SLE患者和非活动期SLE患者血清中的IL-10水平与PBMC上的IL-10R的表达水平呈正相关(r=0.888和r=0.787,P＜0.05).结论:Th2型细胞因子及其受体的异常表达可能在SLE疾病活动和发展过程中起重要作用.检测SLE患者PBMC中Th2型细胞因子受体的表达水平可作为疾病的活动性指标之一.

摘要:

目的：研究各种白血病细胞膜IL-6R的表达、密度及亲和力，为深入探讨对IL-6／IL-6R系统介导IL-6-PE40外毒素融合蛋白靶向杀伤白血病细胞的敏感性提供可靠依据。方法：采用放射性配基结合实验(RBA)并结合Satchard作图法，系统分析IL-6R在8种极具代表性的人类白血病细胞系U937，HL-60，KG1，TF1，K562，CEM，HUT28和Raji上的表达密度及亲和力，同时应用流式细胞术(FACS)检测IL-6R的α和β亚单位蛋白在这些白血病细胞上的表达。结果：RBA表明，粒、单、红白血病细胞系HL-60，U937，KG1和TF1表面存在着高亲和力IL-6R，平均IL-6R密度／细胞分别为2 502个，2 874个，2 319个及9 329个，而淋系白血病细胞系CEM，HUT28和Raji以及慢粒K562细胞系则未测到IL-6R。FACS显示，HL-60，KG1，U937和TF1均高表达IL-6R的α亚单位蛋白，而CEM，HUT28及K562则不表达IL-6Rα亚单位蛋白；IL-6Rβ亚单位蛋白在U937，KG1，TF1，HUT28及CEM中呈阳性表达，而在HL-60，Raji和K562细胞中则为阴性。结论：鉴于粒、单、红白血病细胞异常高表达IL-6R，而淋系和慢粒白血病呈阴性表达这一事实，提示急非淋白血病可能更适合用重组IL-6-PE40外毒素融合蛋白进行IL-6／IL-6R介导的靶向治疗。

摘要:

为分析LRP16基因启动子区顺式调控元件,为深入研究LRP16基因的表达调控机制奠定基础.首先在NCBI的人类基因组数据库中截取并下载LRP16基因转录起始位点5'侧翼区2.6kb的基因组序列,设计PCR引物,从健康外周血单个核细胞中扩增LRP16基因的启动子分子;然后构建包含长度为2.6kb的LRP16基因启动子分子的pGL3-LRP16启动子荧光素酶报道重组子,转染入Hela细胞后检测荧光素酶活性;最后利用Genomatix MatInspector Release professional 5.3、RSA-tools和TESS 3个启动子顺式调控元件数据库对LRP16基因启动子进行分析.结果表明LRP16基因启动子DNA序列具有真核启动子活性,该区域既有通用启动子结构,又具有与肿瘤发生、细胞周期调控和急性反应期蛋白有关的顺式调控元件,包括:Sp1、T-Ag、ZF5、CAC盒、PU.1、c-Ets、XPF-1、IL-6受体、雌激素受体和视黄醇受体.

摘要:

目的 构建以及表达鼠白介素6 (IL-6)受体融合蛋白.方法 采用基因重组技术将鼠IL-6受体融合基因克隆到杆状病毒质粒Bacmid上,重组杆状病毒质粒在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,转染后收集重组杆状病毒,采用空斑实验检测第3代重组杆状病毒的滴度,并通过Western blot来确定目的蛋白的表达.结果 重组杆状病毒质粒在DH10Bac大肠杆菌中包装成功,并转染Sf9细胞后得到重组杆状病毒,第3代重组杆状病毒的滴度为5×107 pfu/ml,Western blot表明目的蛋白在Sf9细胞中表达.结论 成功表达了鼠IL-6受体融合蛋白,为进一步研究IL-6在炎症性疾病中的作用奠定了实验基础.