摘要:

为深入研究滤泡辅助性T细胞(Tfh)的分化调控机制,比较并建立了人Tfh细胞体外诱导分化的模型:分别采用外周血淋巴细胞直接分离以及磁珠分选后的细胞诱导分化,比较不同来源Na(i)ve T细胞的分化结果,同时探究了TCR刺激信号anti-hCD3e的固相包被与可溶性刺激对分化效率的影响,并考察极化因子IL-12不同浓度诱导Tfh细胞分化效果,利用流式细胞术检测Tfh分化效率(CD4+ CXCR5+ ICOS+ PD-1+),结合ELISA法检测Tfh标志细胞因子IL-21的表达水平,最终确定了5 μg/mL anti-hCD3e抗体预包被4℃过夜,磁珠分选后的T细胞在IL-12终浓度为1 ng/mL时与其他极化因子诱导分化6d后,分化水平可达20.4％,初步建立了人Tfh细胞体外诱导分化最佳条件,为探讨人Tfh细胞分化机制及相关的靶向Tfh的分子药效、毒性与细胞水平的代谢实验提供了有效的检测平台.

摘要:

目的 构建真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Ascl2,并在真核细胞HEK293T细胞中表达,为今后研究Ascl2基因在Tfh细胞的相关分子机制奠定实验基础.方法 PCR方法扩增健康人外周血单个核细胞中Ascl2基因,连接至pIRES2-AcGFP1质粒的多克隆位点中,构建pIRES2-AcGFP1-Ascl2重组质粒.通过脂质体转染法对HEK293T细胞进行转染.Realtime-PCR及Westernblot方法分析转染pIRES2-AcGFP1-Ascl2重组质粒的HEK293T细胞中Ascl2表达情况.结果 经Realtime-PCR及Westernblot方法,证实Ascl2基因能够在HEK293T细胞中正确表达.结论 成功建立表达Ascl2基因的pIRES2-AcGFP1-Ascl2重组质粒,并能在HEK293T细胞中表达,为进一步研究Ascl2在自身免疫性疾病中Tfh细胞的相关机制奠定了实验基础.

摘要:

目的 检测肝移植术前和术后患者外周血滤泡性辅助性T细胞(Tfh)及其分子表达特点,探讨其在肝移植免疫中的作用.方法 肝移植术后患者及健康对照各20例,其中移植术后肝功能稳定者13例,对其进行断面研究;余7例病例资料完整,进行随访研究.应用流式细胞仪检测所有入组者的Tfh细胞频率,并对随访患者进行术后1月的动态监测,同时检测其丙氨酸转氨酶(ALT)水平.结果 与移植术前相比,移植术后患者外周血CD4+CXCR5+Tfh和CD4+CXCR5+PD-1+细胞频率明显升高(P＜0.05),CD4+CXCR5+ICOS+细胞虽有上升趋势,但无统计学意义.随访发现移植术后肝功能稳定患者CD4+CXCR5+Tfh水平在移植术后明显上升,1周后达峰值随后下降,其ALT水平也在术后第10天达到峰值后降低.随访期间1例患者发生急性排斥反应,其CD4+CXCR5+Tfh水平与ALT水平变化趋势一致.肝功能稳定组与健康对照组相比,CD4+CXCR5+Tfh、CD4+CXCR5+PD-1+和CD4+CXCR5+ICOS+细胞频率均明显升高(P＜0.05).结论 外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞在肝移植后表达上调,可能参与了肝移植术后的免疫调节.

摘要:

目的 研究哮喘小鼠体内Tfh细胞以及Bcl-6蛋白的变化,并初步探讨氨茶碱对哮喘的治疗作用.方法 4～6周龄BALB/c小鼠40只,随机分成4组,每组10只.分别为正常对照组、哮喘模型组、氨茶碱治疗组及地塞米松阳性对照组.后3组建立哮喘模型后对应给以基础处置.按两因素析因设计测取小鼠气道反应性资料,HE染色观察小鼠肺组织的病理形态,流式细胞术检测Tfh细胞的比例变化,Western-blotting检测Bcl-6的蛋白表达量,Elisa法测定肺泡灌洗液以及血清中IL-4、IL-10的水平.结果 哮喘模型组小鼠的气道阻力较正常组小鼠显著升高(P＜0.05),HE染色切片中气道平滑肌增厚,且有大量的炎症细胞浸润,炎症评分较正常组明显升高(P＜0.05),小鼠脾脏中的Tfh细胞的比例较正常对照组小鼠显著升高,Bcl-6蛋白含量较正常组明显升高,血清以及肺泡灌洗液中IL-4含量较正常对照组显著升高,而IL-10的水平显著下降;而氨茶碱治疗组以及地塞米松阳性对照组的气道阻力较哮喘模型组小鼠显著降低(P＜0.05),小鼠HE染色切片发现其炎症细胞浸润程度较哮喘模型组显著降低,Tfh细胞的比例较哮喘模型组显著降低,肺组织中Bcl-6蛋白表达水平较哮喘模型组显著降低,血清以及肺泡灌洗液中IL-4含量较哮喘模型组明显下降,IL-10水平显著升高.结论 哮喘小鼠Tfh细胞比例增加,Bcl-6蛋白水平升高,氨茶碱可以有效改善哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性,可能与其影响Tfh细胞比例以及IL-4、IL-10的水平有关.

摘要:

目的:探讨他克莫司(FK506)作为佐剂通过刺激Tfh细胞增强疫苗体液免疫水平的机制.方法:利用FK506与模式蛋白(卵清白蛋白,OVA) 皮下注射免疫BALB/c小鼠,免疫三次,利用ELISA方法检测抗体水平;利用抗体染色流式细胞仪检测Tfh细胞、B细胞表面分子IL-21R及记忆性B细胞标志分子CD27表达.结果:FK506作为OVA蛋白佐剂,能够显著提高小鼠OVA特异性的IgG水平,增强体液免疫水平;免疫后的小鼠Tfh细胞表达IL-21水平显著高于其他对照组.同时,B细胞表达IL-21R及记忆性B细胞标志分子CD27显著高于其他对照组.表明FK506作为佐剂刺激Tfh细胞表达IL-21,作用于B细胞增强抗体水平.结论:FK506能够作为蛋白疫苗佐剂刺激Tfh细胞表达IL-21;IL-21可能通过与B细胞表面IL-21R作用,增强抗体的分泌;并刺激记忆性B细胞的产生,进而增强体液免疫水平.