摘要:

采用沙培方法,利用生理生化试验及半定量PCR方法,研究了保护剂HN对玉米ALS、GSTs活性及GSTs的mRNA表达量的影响.结果表明,保护剂对6个玉米品种的ALS、GSTs均具有诱导作用,但对不同品种的诱导增加百分率却不同.对氯嘧磺隆敏感的玉米东甜3号的GSTs诱导增加百分率达到59.18%,对其ALS的诱导倍数为叶部1.29倍,根部2.30倍;对氯嘧磺隆耐性较高的玉米屯玉88 GSTs诱导增加百分率为19.26%.其ALS的诱导倍数为叶部1.07倍,根部2.07倍.氯嘧磺隆和保护剂均可以诱导玉米GSTs mRNA的相对表达量的增加,保护剂的诱导作用更强.

摘要:

为分析生长激素(growth hormone,GH)基因和胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)基因对绵羊生长发育的作用,以6月龄萨福克公羊为试验材料,利用荧光定量PCR SYBR Green-Ⅰ荧光染料法,对绵羊肠系膜淋巴结、心脏、肝脏、垂体、大脑、肾脏、骨骼肌、皮肤、肺脏、睾丸和脾脏11个组织中GH和IGF-1基因的表达水平进行相对定量分析.结果表明,GH基因在睾丸、肠系膜淋巴结和脾脏中的表达量显著高于心脏、肝脏、大脑、肾脏和骨骼肌(P＜0.05);IGF-1基因在肝脏和肠系膜淋巴结中的表达量显著高于心脏、垂体、大脑、肾脏、骨骼肌、皮肤、肺脏、睾丸和脾脏(P＜0.05).说明绵羊GH和IGF-1基因有特定的组织表达模式;GH基因与免疫、繁殖及机体的生长发育密切相关;IGF-1基因与生长发育及免疫密切相关,肝脏不仅是IGF-1的主要合成器官,也是该基因特异性表达的主要器官组织之一.GH和IGF-1基因均具有一因多效作用.

摘要:

为探讨热应激对我国地方鸡种与国外培育蛋鸡品种繁殖性能、血液生殖激素及相关基因mRNA表达量的影响,试验选择体况相近的112日龄济宁百日鸡和海兰褐鸡各96只,随机分为适温组((25±0.26)℃)和高温组((38±0.26)℃)2个处理,在人工环境气候舱中饲养,每个处理各设8个重复,每个重复6只,试验持续28 d.测定112、119、126和140日龄时的卵巢重量、卵泡总数和血液生殖激素浓度及生殖轴相关基因mRNA相对表达量.结果表明:1)适温条件下海兰褐鸡的卵巢、总卵泡发育好于济宁百日鸡,而热应激第7天济宁百日鸡和海兰褐鸡只出现明显的卵巢发育受阻、总卵泡数量增生缓慢(P＜0.05).2)在整个热应激期高温组卵泡刺激素(FSH)和促黄体生成素(LH)含量显著下降(P＜0.05),热应激7d后雌二醇(E2)含量显著减少(P＜0.05)、孕酮(P4)含量先升高后显著下降(P＜0.05)；促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)含量显著高于适温组(P＜0.05),济宁百日鸡高温组各血液生殖激素水平的变异系数高于海兰褐,且差异不显著(P＞0.05).3)适温组的济宁百日鸡促性腺激素释放激素(GnRH)、催乳素(prolactin,PRL)、卵泡刺激素-β(FSH-β)、促卵泡素受体(LHR)、雌激素受体(ESR)、催乳素受体(PRLR)、卵泡刺激素受体(FSHR)的mRNA表达量均高于海兰褐鸡,但无显著差异(P＞0.05)；而高温组济宁百日鸡mRNA表达量除PRL以外,均显著高于海兰褐鸡(P＜0.05).结果提示,地方品种在热应激环境条件下卵巢、总卵泡发育和各血液生殖轴相关激素的分泌调控机能强于外来品种；并且生殖轴相关激素mRNA表达量的变化具有品种效应.

摘要:

[目的]探讨17β-雌二醇（E2）对体外培养的绵羊输卵管上皮细胞内抗菌肽SBD-2基因表达的影响。[方法]根据E2添加剂量设10-6 mol/L组、10-7 mol/L组、10-8 mol/L组、10-9 mol/L组和10-10 mol/L组，各组细胞于加药后2、6、12、24及48 h，分别采用real-time RT-PCR技术检测E2对绵羊输卵管上皮细胞内SBD-2 mRNA表达量的影响，同时设相应的对照组。[结果]以剂量为10-8 mol/L的E2处理输卵管上皮细胞6 h后，其SBD-2的表达量达到极值，极显著高于对照组（P＜0.01），以剂量为10-10 mol/L的E2处理输卵管上皮细胞24 h和48 h后，也能显著促进SBD-2的表达（P＜0.01，P＜0.05），之后随着各时间段E2剂量的增加，SBD-2 mRNA的表达量呈逐渐降低趋势。[结论]一定剂量的E2能够在处理细胞后的特定时间促进绵羊输卵管上皮细胞中SBD-2 mRNA的表达，E2对输卵管上皮细胞SBD-2 mRNA表达的调节作用存在时间效应与剂量依赖关系。

摘要:

紫花苜蓿的秋眠与光敏色素基因的表达紧密相关.为了建立一种快速、灵敏检测紫花苜蓿PHYA 和 PHYB 基因mRNA表达水平的实时逆转录聚合酶链反应(FQ-PCR)体系,本研究提取紫花苜蓿叶片总RNA,PCR扩增Actin、PHYA和PHYB基因片段,将其克隆入pMD18-T载体进行测序.基于SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料建立检测紫花苜蓿 PHYA 和 PHYB 基因mRNA表达水平方法,对PCR产物的熔解曲线进行分析评价其特异性,经测序鉴定目的片段已插入pMD18-T载体内,重组质粒的构建非常成功.为验证其准确性,我们检测紫花苜蓿WL-232 PHYA、PHYB mRNA表达量,结果证明:所建立的测定PHYA和PHYB基因mRNA水平的方法准确,适用于紫花苜蓿的各种组织的大量样本检测.

摘要:

为深入理解杀虫剂胁迫对烟粉虱Bemisia tabaci适应逆境能力的影响,本研究运用实时荧光定量PCR技术测定了LC25,LC50和LC753种浓度的烯啶虫胺、毒死蜱和高效氯氰菊酯分别处理对烟粉虱地中海隐种B,tabaciMediterranean成虫体内热激蛋白hsp70表达水平的影响.结果表明:在低温(15℃)条件下,LC50和LC75的烯啶虫胺、毒死蜱、高效氯氰菊酯可显著诱导烟粉虱地中海隐种hsp70的表达量增加,此后随时间延长hsp70表达量逐渐下降,到72 h时恢复到对照水平,但LC25的3种杀虫剂对hsp70的表达无明显影响；在常温(25℃)下,较高浓度(LC50和LC75)的烯啶虫胺、毒死蜱和高效氯氰菊酯处理24h同样可促进hsp70表达量的增加,然后hsp70表达量逐渐下降,到72 h时恢复至正常水平,但低浓度(LC25)的3种药剂处理后hsp70表达量随时间延长而增加,到72 h时达到最高；在高温(32℃)条件下,LC25和LC50的烯啶虫胺、毒死蜱和高效氯氰菊酯处理24 h可显著增强hsp70的表达水平,此后随时间的延长hsp70表达恢复至正常水平.杀虫药剂诱导的hsp70表达量增加增强了烟粉虱地中海隐种对杀虫药剂和高温的耐受能力,这可能是导致其在我国快速扩张的原因之一.

摘要:

本试验旨在研究饲粮能量和蛋白质水平对滩羊小肠中小肽和氨基酸转运载体mRNA表达量的影响.选取112只健康、体重相近的滩羊,随机分成4组,每组4个重复,每个重复7只羊.标准水平的饲粮能量和蛋白质水平参考《肉羊饲养标准》(NY/T 816-2004),各组试验滩羊分别饲喂不同能量和蛋白质水平饲粮:0.84×标准水平(Ⅰ组)、0.96×标准水平(Ⅱ组)、1.08×标准水平(Ⅲ组)和1.20×标准水平(Ⅳ组).试验根据羊体重分2个阶段:29~35 kg和36~40 kg.于每个阶段末,每个重复屠宰1只试验羊,取其小肠组织样,运用实时荧光定量PCR技术,研究小肽转运载体1(PepT1)、y+型氨基酸转运载体1(CAT1)、兴奋性氨基酸转运载体3(EAAT3)mRNA表达量的变化.结果表明:1)在29~35 kg阶段末,小肠中PepT1 mRNA的表达量随着饲粮能量和蛋白质水平的提高呈先下降再上升的趋势,Ⅱ组显著低于其他3组(P<0.05);Ⅳ组小肠中CAT1 mRNA的表达量显著高于其他3组(P<0.05);Ⅲ组小肠中EAAT3 mRNA的表达量显著高于其他3组(P<0.05).2)在36~40 kg阶段末,Ⅱ组小肠中PepT1 mRNA的表达量显著高于其他3组(P<0.05);Ⅱ组小肠中CAT1 mRNA的表达量显著高于Ⅲ组(P<0.05);小肠中EAAT3 mRNA的表达量随着饲粮能量和蛋白质水平的提高呈上升趋势,Ⅲ组和Ⅳ组小肠中EAAT3 mRNA的表达量显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05).由此可见,饲粮能量和蛋白质水平会影响滩羊小肠中PepT1、CAT1、EAAT3 mRNA的表达量,使机体对小肽和氨基酸的吸收利用率随之改变,以适应滩羊的生长发育.

摘要:

本试验旨在探讨生长激素(GH)和胰岛素样生长因子Ⅰ (IGF-Ⅰ)对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞内调控乳蛋白合成的关键激酶及调节因子mRNA表达量的影响.试验对纯化后的荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞进行4种处理,对照组采用无血清生长培养基,试验组在对照组的基础上分别添加GH(100 ng/mL)、IGF-Ⅰ(l00 ng/mL)和GH(100 ng/mL)+IGF-Ⅰ(100 ng/mL).培养24 h后,采用实时定量PCR (RT-qPCR)法测定K-酪蛋白基因以及调控乳蛋白合成的关键激酶及调节因子的mRNA表达量,并测定生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子Ⅰ受体(IGF-ⅠR)mRNA表达量.结果表明:体外培养的奶牛乳腺上皮细胞可以表达GHR和IGF-ⅠR mRNA,各试验组均能显著提高K-酪蛋白(CSN3)mRNA表达量(P＜0.05),但未发现GH和IGF-Ⅰ复合存在累积效应；与对照组相比,GH组有提高E74-样转录因子5(ELF5)mRNA表达量的趋势(P＜0.10),而IGF-Ⅰ组显著提高了哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和核糖体蛋白S6激酶1(rpS6K1)mRNA表达量(P＜0.05),GH+IGF-Ⅰ组未呈现加强作用.结果提示,GH和IGF-Ⅰ可能单独通过影响调控乳蛋白合成的关键激酶及调节因子mRNA表达来调节K-酪蛋白的合成.

摘要:

为了便于对所检测样本进行比较,在real-time Q-PCR反应的指数期,首先需设定一定荧光信号的域值,以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号(baseline),荧光域值的默认设置是3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍.如果检测到荧光信号超过域值被认为是真正的信号,它可用于定义样本的临界循环数(Ct)即每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数.本研究表明每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,即起始拷贝数越多,Ct值越小.利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,因此只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数,可以对科研和生产起到一定的参考价值.

摘要:

超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)在清除工蜂体内自由基的过程中起着关键的作用,其活性和基因表达量的高低与蜜蜂的寿命、抗病力有直接的联系,进而影响着蜂群的生产性能.本研究采用实时荧光定量PCR法研究意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica不同发育时期铜锌超氧化物歧化酶(copper zinc superoxide dismutase,CuZnSOD)、锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)及过氧化氢酶(catalase,CAT)基因mRNA表达量的变化.实验分别在幼虫、蛹、成虫3个阶段5个时间点(产卵后5 d的幼虫,产卵后14 d的蛹,出房后1 d,12 d,32 d的成虫)取样.结果表明,3个抗氧化酶基因在各个发育阶段均有表达,其中CuZnSOD和MnSOD mRNA的表达量在幼虫到蛹期和出房后12-32 d两个阶段呈下降趋势,而都以出房后1 d时表达量最大,蛹期表达量最小,且显著低于其他4个时期(P<0.05).CuZnSOD基因mRNA的表达量在成虫阶段的下降趋势不明显,MnSODmRNA的表达量则显著下降(P<0.05);而CAT基因的mRNA表达量以蛹期最低,且其表达量随蜜蜂的生长发育稳定上升,在出房后12 d和32 d时表达量显著高于其他3个时期.这些研究结果在分子水平上揭示了抗氧化酶基因在蜜蜂不同发育时期的作用.