双价杀虫基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达

• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 双价载体 抗虫基因 植物转化 烟草抗虫性
• 年，卷（期）: 1998,（1）
• 页码范围: 7-13
• 页数: 7页
• 分类号: S572
• 语种: 中文

摘要

该文报道了抗虫植物基因工程研究中的新进展一转双价杀虫基因烟草的获得.用PCR的方法对来自豇豆的胰蛋白酶抑制剂基因(CPTI)进行了修饰,在基因5''及3''端分别加入了克隆所需的PSTI和SCAI限制性酶切位点,去除了原基因中5''端非翻译区序列,并进一步定点突变了基因内部存在的ECORI位点.序列分析表明了基因修饰的准确性.将该基因与人工合成的CFMCRYIAB.T.杀虫基因分别加在植物中可提高其转录和翻译能力的表达调控元件,同时构建到植物表达载体PBII31.1中,获得了两个高效双价杀虫基因植物表达载体PG－BI131S4ABC及PGBI131D4ABC.载体中用于提高目的基因转录和翻译的调控元件包括增强子序列、35S启动子、序列、KOZAK序列、多联终止密码子、正确切割和加工序列、POLY(A)序列及NOS终止子.该载体中还带有卡那霉素抗性选择标记基因和GUS报告基因.通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草NC80,获得了－批抗卡那霉素烟草植株.经GUS及分子生物学检测,证实了双价杀虫基因在烟草中的整合与表达.生物学杀虫试验表明转双基因烟草植株具有高抗虫性.