应用PCR技术检测沙门氏菌

• 作者: 章新生 臧富妍
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 沙门氏菌 PCR DNA探针
• 年，卷（期）: 1999,（2）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 147-151
• 页数: 5页
• 分类号: S852.61
• 字数: 4454字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4545.1999.02.014

摘要

参照文献报道的根据沙门氏菌组氨酸转运操纵子基因片段所设计的引物序列,合成了1对长25 bp的引物.对沙门氏菌属A～F各群中共16株沙门氏标准菌株和其他12株非沙门氏菌标准菌株进行DNA抽提扩增,结果沙门氏菌PCR产物都出现495 bp的特异性DNA扩增带,而非沙门氏菌均未出现扩增条带,证明这对引物具有沙门氏菌属特异性.选用Hind Ⅲ内切酶对PCR产物直接进行酶切,紫外灯下可见2条电泳带,其长度(大片段长度为314 bp,小片段为180 bp)与目的基因序列相符合.用低融点琼脂糖对PCR产物电泳回收、纯化,采用随机引物法以α-32P-dCTP标记探针,分别与沙门氏菌和非沙门氏菌靶DNA进行Dot blot和Southern blot,杂交后用普通X光胶片自显影,结果探针只与沙门氏菌DNA杂交,并出现很强的杂交信号,而与非沙门氏菌不杂交,证实扩增产物是目的基因片段.以稀释的核酸分子量标准λDNA/Hind Ⅲ酶切片段作对照,将抽提的沙门氏菌DNA作系列稀释,测定该PCR体系的敏感度,结果表明,此PCR体系能检出30 pg以上的细菌DNA.采用上述PCR技术,对沙门氏菌人工感染发病、自然发病小鼠、雏鸡的血液、脏器、粪便进行检测,均出现阳性结果.本研究表明,沙门氏菌PCR检测方法是一种快速、敏感和高度特异的诊断方法,可推广应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	臧富妍	华南农业大学动物医学系	3	54	2.0	3.0
2	章新生	华南农业大学动物医学系	1	50	1.0	1.0