减蛋综合征病毒末端片段的克隆及细胞内DNA重组

• 作者: 万遂如 刘振润 向华 宣华 李茂祥 王国庆 章金刚
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 减蛋综合征病毒 末端蛋白 末端片段 重组DNA
• 年，卷（期）: 1999,（3）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 226-229
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65|Q78
• 字数: 3165字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4545.1999.03.006

摘要

采用9～10日龄非免疫鸭胚增殖的减蛋综合征病毒(EDSV)AA-2毒株,经差速离心法浓缩纯化后,提取病毒基因组DNA.采用碱变性法除去病毒基因组共价结合的末端蛋白(TP).用限制性内切酶HindⅢ水解纯化的EDSV基因组DNA.经低熔点琼脂糖凝胶电泳后,回收C、D、E片段.克隆到pUC19载体的Hind Ⅲ和SmaⅠ双酶切位点及Hind Ⅲ位点上,经蓝白斑筛选和单、双酶切鉴定,获得了pUHC、pUHD、pUHE重组质粒,其中pUHC含有末端片段.将EDSV SalⅠ水解产生并回收的大片段与pUHC在95℃水浴中变性,65℃复性后,用钙离子介导法,共转染50%～70%的单层鸭胚成纤维细胞,转染后36 h开始产生细胞病变(CPE).48 h后将病变细胞反复冻融,经尿囊腔接种9～10日龄鸭胚,回收的尿囊液能凝集鸡红细胞,这种血凝性能被EDSV高免血清抑制,电镜下观察到腺病毒样颗粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	向华	解放军农牧大学兽医学院	1	12	1.0	1.0
2	宣华	解放军农牧大学兽医学院	2	13	1.0	2.0
3	李茂祥	解放军农牧大学兽医学院	1	12	1.0	1.0
4	王国庆		1	12	1.0	1.0
5	刘振润	解放军农牧大学兽医学院	1	12	1.0	1.0
6	万遂如	解放军农牧大学兽医学院	1	12	1.0	1.0