血小板生成素基因在NIH/3T3细胞中的表达与调控

• 作者: 伏爽 王德炳 王申五 程康 陆爱丽 魏旭东
• 来源期刊: 中国生物化学与分子生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Tet-On基因表达系统 基因表达与调控 强力霉素 血小板生成素
• 年，卷（期）: 2000,（3）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 312-317
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4836字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7626.2000.03.005

摘要

应用Tet-On基因表达系统,调控血小板生成素(TPO)基因在NIH/3T3细胞中的表达时间与水平.籍脂质体介导的基因转移方法,pTet-On质粒转染NIH/3T3细胞株,得到稳定细胞株NIH/3T3-Tet-On.pTRE/TPO与pTK-Hyg质粒共转染NIH/3T3-Tet-On细胞株,得到双稳定细胞株NIH/3T3-Tet-On-TPO.在培养基中加入或不加强力霉素,RT-PCR、Western印迹及EUSA法检测培养上清TPO表达.结果表明,当培养基中不加强力霉素时,TPO无明显表达(0.1μg/L);当培养基中加入2 mg/L强力霉素时,TPO表达明显增高(10.8μg/L).TPO表达水平与强力霉素浓度有关,随强力霉素浓度增高,TPO表达增加.TPO表达水平还与强力霉素作用时间有关,加入强力霉素6 h后,TPO表达明显增加(1.2μg/L),随培养时间延长,TPO表达增加,24 h达到峰值(10.8μg/L),而且这种诱导作用是可逆的.为进一步进行TPO基因表达调控的体内研究奠定基础,有望为TPO基因治疗提供一条可控的安全途径.