重组逆转录病毒载体质粒的构建及其鉴定方法的比较

• 作者: 于敏 公维波 吴赤红 曾争 王勤环
• 来源期刊: 中国学术期刊文摘
• 关键词: 逆转录病毒载体 鉴定 方法
• 年，卷（期）: 2000,（10）
• 页码范围: 1267-1269
• 页数: 3页
• 语种: 中文

摘要

为构建抗HBV反义RNA重组逆转录病毒载体质粒,利用限制性内切酶分析、DNA测序、荧光PCR定量(FQ-PCR)三种方法鉴定构建的质粒,并比较三种鉴定方法的优缺点.用合成互补于HBVX区(1400-1430)的X片段,互补于HBV P区(2375-2405)的P片段,分别构建表达单靶区反义X或P的重组逆转录病毒载体质粒PLXSN+X、PLXSN+P和表达双靶区反义X和P重组逆转录病毒载体质粒PLXSN+X/P,表达双靶区正义X和P的重组载体质粒PLXSN+Xpos/Ppos.用FQ-PCR、限制性内切酶分析及DNA测序三种方法检测质粒.经FQ-PCR、限制性内切酶分析、DNA测序三种方法鉴定克隆质粒,结果完全相符.正向、反向插入的重组逆转录病毒载体质粒与预期的序列完全符合.说明PCR方法鉴定质粒较限制性内切酶酶切分析和DNA序列测定分析方法省时,方便且较经济.