定量检测Hp cagA基因内参标模板的构建及测序

• 作者: 侯瑜 崔大祥 李陕区 肖乐义 苏成芝 郭晏海 阎小君 韩锋产
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 细胞毒素相关蛋白基因A 聚合酶链反应 内参标模板 乳糖操纵基因
• 年，卷（期）: 2000,（2）
• 所属期刊栏目: 研究原著
• 页码范围: 131-134
• 页数: 4页
• 分类号: R573
• 字数: 4702字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2000.02.003

摘要

目的构建竞争性定量PCR检测幽门螺杆菌(Hp)cagA基因的内参标模板并做序列测定.方法根据cagA基因及Lac Ⅰ蛋白的特异性结合部位的序列,设计二对PCR引物(cagAp1,cagAp2,cagAp3,cagAp4)其中cagAp1及cagAp3用于扩增cagA基因2593～2788位碱基间196 bp的片段,cagAp2及cagAp4用于扩增2789～2993位碱基之间204 bp的核酸片段;在cagAp1的5'-端引入了BamHⅠ的限制性酶切位点,在cagAp2的5'-端结合了Sal Ⅰ的限制性酶切点.在cagAp3的5'-端引入Lac Ⅰ蛋白的特异性结合序列(21bp),在cagAp4的5'-端结合了cagAp3之5'-端21个碱基的反义DNA序列利用重组PCR,将乳糖操纵子中Lac Ⅰ蛋白的特异性结合序列重组入cagA基因400bp的片段中,得到cagA基因片段的重组体(rfcagA).将重组rfcagA定向克隆入pUC19进行序列测定.结果用DNA序列分析仪双向测定rfcagA的序列,其含400bp的cagA片段及Lac Ⅰ蛋白特异性结合部位的序列(21 bp),一级结构完全正确.结论内参标模板rfcagA构建,对竞争性定量PCR检测HpcagA基因的方法的建立具有重要价值.