内参基因β-actin质粒标准品的构建

• 作者: 史进方 樊一笋 王玉林 蔡惠芬 顾国浩
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: β-actin 内参基因 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2008,（48）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 9501-9504
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 3634字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.48.027

摘要

为构建检测内参基因β-actin mRNA表达水平差异的标准品,以成人外周血细胞的总RNA为模板、Random 6 mers为引物反转录合成cDNA,用该cDNA为模板PCR扩增人β-actin基因相应的cDNA片段,构建PMD-18-β-actin重组质粒,鉴定测序后,用荧光定量PCR制作标准曲线.结果外周血提取的总RNA完整性良好,构建的β-actin质粒经PCR扩增后得到-186 bp的清晰条带.测序结果与目的片段完全一致,且质粒的原始浓度为2.39×1013copies/mL,倍比稀释至2.0×104copies/mL均能得到良好的标准曲线(R2=1),提示构建β-actin基因荧光定量PCR标准质粒成功.