实时荧光定量PCR构建朊病相关细胞因子标准品质粒和标准曲线

• 作者: 刘爱林 刘爱玲 周向梅 杨鸣琦 赵德明
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: PrP106-126 Real-time PCR 质粒 标准曲线
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 11-14
• 分类号: S852.659.27
• 字数: 2789字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2010.06.003

摘要

为能够用实时荧光定量PCR检测PrP106-126作用的鼠巨噬细胞细胞因子的表达水平,构建目的基因IL-1β、TNF-α、IL-6和内参基因β-actin的标准品质粒和标准曲线.根据GenBank中鼠基因编码区保守序列,设计特异性引物;细胞经PrP106-126作用后,提取总RNA.经反转录、PCR扩增、纯化、连接和转化后,提取质粒并测序鉴定,获得IL-1β、TNF-α、IL-6和β-actin质粒;将质粒梯度稀释,进行荧光定量PCR,获得标准曲线及回归方程.结果显示,产物溶解曲线峰值单一,引物特异性高;标准曲线相关系数r2=0.999,表明线性关系好,成功构建了目的基因和内参基因的标准品质粒和标准曲线.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨鸣琦	西北农林科技大学动物医学院	76	441	13.0	16.0
2	赵德明	中国农业大学国家海绵状脑病实验室	372	1803	20.0	27.0
3	刘爱林		8	14	3.0	3.0
4	刘爱玲	西北农林科技大学动物医学院	2	6	1.0	2.0
8	周向梅	中国农业大学国家海绵状脑病实验室	100	213	8.0	12.0