绵羊朊病毒受体37 kD/67 kD LRP/LR实时荧光定量PCR 标准质粒和标准曲线的构建

• 作者: 乔俊文 李玉荣 王伊琴 苏晓鸥 赵德明
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: LRP/LR Real-time PCR 绵羊 重组质粒 标准曲线
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 15-20
• 页数: 6页
• 分类号: S855.9+9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-4333.2009.04.003

摘要

为实时相对荧光定量PCR检测绵羊组织中朊病毒受体LRP/LR mRNA表达水平,构建目的基因LRP/LR、内参基因β-actin的标准质粒和标准曲线;根据GeneBank中绵羊37 kD/67 kD LRP/LR(LRP/LR)和B-actin 基因编码区保守序列,设计特异引物;提取肠道组织mRNA,经反转录RT-PCR扩增,产物回收纯化后,与pGEM-T-easy载体连接,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α;质粒提取后经酶切、PCR和测序鉴定后,获得阳性LRP/LR,β-aetin重组质粒;将阳性重组质粒107～102梯度稀释作为模板,然后进行实时荧光定量PCR;系统软件自动生成标准曲线及回归方程.结果显示产物溶解曲线峰值单一,说明无引物二聚体及引物特异性高;LRP/LR和β-actin标准曲线相关系数分别为r2=0.999,r2=0.997,说明线性关系好;重复性试验结果显示所构建的重组质粒10次同条件扩增均Ct值具有较好的重现性,且变异率均小于5%,说明标准曲线重复性好,稳定性高.说明成功构建目的基因LRP/LR,内参基因β-actin标准质粒和标准曲线,为实时荧光定量PCR检测绵羊组织中朊病毒受体mRNA表达水平提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李玉荣	河北农业大学动物科技学院	37	168	8.0	11.0
2	王伊琴	河北农业大学动物科技学院	1	2	1.0	1.0