荧光定量PCR检测TCR VγI-Jγ基因重排标准品质粒及标准曲线的构建

• 作者: 徐兵 李冰 江小工 许文娟
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 聚合酶链反应 基因重排 标准曲线 质粒
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 115-117
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 4070字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2004.02.005

摘要

目的:构建荧光定量PCR检测TCR VγI-Jγ基因标准品重组质粒和标准曲线,为建立实时荧光定量PCR准确检测淋巴系肿瘤微小残留病奠定基础.方法:对TCR VγI-¨基因进行序列分析,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针.提取急性淋巴细胞白血病患者的DNA,经PCR扩增,产物纯化后与pMD 18-T Vector连接,转化到大肠杆菌DH5α,筛选得到标准品的质粒.结果:重组质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长,表明TCRVγI-Jγ基因已成功克隆.以100～10-5不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增,Ct值分别为21.08、24.34、27.53、30.58和33.25.统计学分析显示Ct值与标准品浓度的对数存在良好线性关系,回归系数为0.998.结论:所构建的TCR VγI-Jγ基因荧光定量PCR检测标准品特异性和线性关系好,准确可靠,利于统一标准.