表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因减毒鼠伤寒沙门疫苗菌的构建和鉴定

• 来源期刊: 中华消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 ureB基因 鼠伤寒沙门菌 疫苗 遗传重组
• 年，卷（期）: 2001,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 526-529
• 页数: 4页
• 分类号: R57
• 字数: 3624字
• 语种: 中文

摘要

目的构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(ureB)基因的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌.方法用PCR扩增ureB基因,经适当酶切-连接反应将其克隆入高效原核表达质粒pTrc99A,进行基因测序,重组质粒鉴定后再导人减毒鼠伤寒沙门菌SL3261,提取重组疫苗菌质粒,PCR和酶切鉴定,筛选阳性克隆.重组ureB能在宿主菌中表达,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和薄层扫描进行蛋白分析.重组菌C57BL/6小鼠喂灌,分批2 d和10 d后处死小鼠,取脾和末段回肠进行细菌培养,挑菌落提质粒鉴定.结果构建携带ureB的重组原核表达质粒pTrc99A-ureB,并将后者成功转化入减毒鼠伤寒沙门菌SL3261,阳性克隆经PCR和酶切证实.SDS-PAGE电泳和薄层扫描分析表明,重组菌SL3261(pTrc99A-ureB)表达相对分子质量为66×103的ureB,约占菌体蛋白总量的26%.小鼠重组菌喂灌2 d或10 d后,脾和末段回肠均发现携目的基因的菌落.结论构建表达Hp ureB的减毒鼠伤寒沙门疫苗菌,为探索制备Hp口服活疫苗奠定了基础.