嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶基因perA在大肠杆菌中的高效表达

• 作者: 刘吉泉 徐成勇 王凡强 王正祥 诸葛健 邵蔚蓝
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 嗜热脂肪芽孢杆菌 过氧化氢酶 表达
• 年，卷（期）: 2002,（2）
• 页码范围: 219-222
• 页数: 4页
• 分类号: Q786:Q939.124.06
• 字数: 3788字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1006-687X.2002.02.021

摘要

利用PCR技术得到嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)过氧化氢酶基因perA,将该基因与表达载体pKK223-3连接构建重组质粒pK-perA,转化大肠杆菌过氧化氢酶HPⅠ和HPⅡ双缺突变株UM2,得到重组大肠杆菌UM2-1. 酶活测定结果表明,表达产物具有正常的生物学活性.SDS-PAGE电泳结果显示出明显的特异性表达条带,单体Mr=86×103,与嗜热脂肪芽孢杆菌所产酶相同.实验表明,重组质粒在宿主UM2中有较好的稳定性,在无选择压力条件下传代60次基本保持稳定,传代100次重组质粒保留80%以上.摇瓶实验确定重组菌的最佳表达条件为:IPTG浓度,0.75 mmol/L;诱导时间3 h;培养基起始pH 6.5;诱导温度37 ℃;装液量50 mL/250 mL.在优化条件下,重组菌产生的过氧化氢酶占菌体总蛋白的8%,酶活力可达35 U/mL,是原始菌株Bacillus stearothermophilus IAM11001的11.7倍. 图2 表1 参10

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	诸葛健	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室	150	1920	23.0	36.0
2	王正祥	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室	120	1443	20.0	31.0
3	邵蔚蓝	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室	54	772	16.0	25.0
4	刘吉泉	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室	7	157	6.0	7.0
5	徐成勇	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室	13	372	10.0	13.0
6	王凡强	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室	4	87	4.0	4.0