C-末端缺陷JAK3逆转录病毒载体的构建及在真核细胞中的表达

• 作者: 唐梅 张平 毕建虹 王蓉 章崇杰 蔡美英 赵宗蓉 魏大鹏
• 来源期刊: 华西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: JAK3(ΔC) 逆转录病毒载体 真核细胞
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 536-539
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 2515字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2002.04.013

摘要

目的以逆转录病毒PLXSN为载体,构建重组逆转录病毒C-末端缺陷的JAK3[c-term deficient JAK3, JAK3(ΔC)]载体PLJAK3(ΔC),以BALB/c 3T3为靶细胞,转染JAK3(ΔC) cDNA,检测JAK3(ΔC)蛋白在真核细胞中的表达情况.为利用JAK3(ΔC)对白血病进行基因治疗的实验研究打基础.方法用限制性内切酶法从质粒PcDNA3-JAK3(ΔC)中分离目的基因片段,连接到逆转录病毒载体PLXSN多克隆位点上构建重组逆转录病毒载体PLJAK3(ΔC),通过转化感受态细菌扩增并检测DNA序列及限制性内切酶酶切鉴定;用脂质体LIPOFECTAMINE介导法将PLJAK3(ΔC)转染包装细胞PA317细胞,并用G418筛选抗性细胞克隆,收集病毒;用该病毒感染靶细胞BALB/c 3T3,G418筛选抗性克隆并测定病毒滴度;抗性细胞扩增培养,细胞溶解后经免疫沉淀(IP)、Western blotting 检测BALB/c 3T3细胞中JAK3(ΔC)的表达情况.结果①重组逆转录病毒载体PLJAK3(ΔC)酶切和DNA测序均表明含有2796 bp的JAK3(ΔC)基因;②病毒滴度为1.2×104 CFU/ml;③PLJAK3(ΔC)转染BALB/C 3T3细胞中表达出了JAK3(ΔC)蛋白,其相对分子质量为107×103.结论该研究构建的C-末端缺陷JAK3重组逆转录病毒载体PLJAK3(ΔC)能有效感染PA317包装细胞并产生高滴度病毒,同时该病毒能有效将目的基因片段导入真核细胞中并表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡美英	四川大学华西医学中心免疫学教研室	49	260	8.0	13.0
2	赵宗蓉	四川大学华西医学中心免疫学教研室	8	50	3.0	7.0
3	张平	四川大学华西医学中心免疫学教研室	139	919	16.0	24.0
4	魏大鹏	四川大学华西医学中心免疫学教研室	81	405	10.0	16.0
5	章崇杰	四川大学华西医学中心免疫学教研室	31	44	4.0	4.0
6	王蓉	四川省人民医院检验科	22	104	5.0	9.0
7	毕建虹	四川大学华西医学中心免疫学教研室	6	34	4.0	5.0