siRNA靶向Her-2逆转录病毒载体构建及其在SKOV3中的表达

• 作者: 冯定庆 凌斌 周颖 朱园园 王梅梅 石永云 祝怀平 程志祥 赵卫东 陈敏 高婷
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: Her-2 RNA干扰 逆转录病毒载体
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 277-280,318
• 页数: 5页
• 分类号: R737.31|Q343
• 字数: 3472字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2007.04.013

摘要

目的 构建并鉴定Her-2特异性siRNA逆转录病毒载体,将其导入SKOV3卵巢癌细胞中,并初步筛选有效抑制Her-2表达的细胞株.方法 体外合成含针对Her-2特异基因序列的寡核苷酸并定向克隆入逆转录病毒载体RNAi-Ready pSIREN-RetroQ,构建的载体通过测序、酶切鉴定后,脂质体介导下转染到包装病毒细胞株PT67中,嘌呤霉素筛选并挑选细胞克隆,收获病毒上清,将病毒上清转染SKOV3中,经过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her-2表达的SKOV3细胞株,并分别通过RT-PCR和免疫组化方法鉴定抑制Her-2表达的效果.结果 成功构建了重组逆转录病毒载体,转染包装病毒细胞株获得的病毒上清成功转染了SKOV3, 并且抑制了Her-2的表达.结论 抑制Her-2表达的SKOV3细胞株的建立,为观察转染siRNA的逆转录病毒表达载体的肿瘤细胞恶性生物学行为变化奠定了实验基础.