人载脂蛋白E7转基因小鼠肾脏cDNA削减文库与cDNA文库

• 作者: 琦祖和 田增遂 薛越强
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 杂交 聚合酶链反应 文库
• 年，卷（期）: 2002,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 86-90
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 字数: 4031字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2002.02.006

摘要

目的以人apoE7基因制备的高脂血症转基因小鼠模型已建成,要用于探查这一突变基因致病的分子机制,首先揭示人apoE7在小鼠体内诱发了那些基因的表达异常,是重要的环节之一.cDNA削减文库是寻找异常高表达的已知和未知基因有效的手段,而cDNA文库更是获取全长基因所必须.方法自正常小鼠与转基因小鼠肾脏同时提取总RNA,再分离mRNA,逆转录制备cDNA后,用两次分子杂交削除转基因鼠cDNA中与正常小鼠相同的部分,再用PCR与择需PCR法扩增转基因鼠特异的基因,克隆入pGEM-T载体后,制备削减文库.未经削减的转基因小鼠cDNA克隆入λgt11载体,制备基因表达文库.结果和结论自高脂血症转基因小鼠肾脏构建的削减文库得到约400个削减克隆,测定了部分克隆的序列,并进行同源性比较.λgt11/cDNA文库滴度1.7×107 pfu/ml,随机测定的克隆其插入片段长约500bp以上.