重组腺相关病毒载体介导的apoA-I和/或LCAT在肌源性细胞中的表达

• 作者: 刘宝瑞 王立峰 王若宁 范乐明 陈丙莺 魏恩会
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 医学
• 关键词: 卵磷脂胆固醇酰基转移酶 胆固醇逆转运 骨骼肌细胞 重组腺相关病毒 基因转移
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 33-38
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 语种: 英文

摘要

卵磷脂胆固醇酰基转移酶（lecithin cholesterol acyl transferase , LCAT）是产生血浆中大部分胆固醇酯（CE）的主要酶，并且是胆固醇逆转运（reverse cholesterol t r ansfer, RCT）中的一个关键因子。将含有人apoA-I和/或LCAT cDNA的rAAVAIL/rAAV L表达载体与pDG质粒经磷酸钙共沉淀法转导入293T细胞中，包装为重组腺辅助病毒（rAAV）；以I odi xanol密度梯度离心，继以肝素亲和层析等方法分离、纯化及浓缩rAAV；斑点杂交鉴定制备的 rAAV颗粒数达7×1014个/L（rAAVAIL）和1×1014个/L（rAAVL）。以rAAVAIL /rAAVL转染小鼠肌源性细胞C2C12，经ELISA、 Western印迹和［3H］-胆固醇标记底物的放射化学方法结果分别表明， apoA-I、 LCAT在转染细胞中持续30天表达；分化为多核的肌管细胞后，仍保持这种表达能力。 PCR结果表明，目的基因已整合入细胞基因组。以rAAV为载体，能有效介导人LCAT 、 apoA-I基因在肌源性细胞中表达，并分泌至细胞外。