抗血小板膜糖蛋白Ⅰbα/Ⅲa双特异单链抗体的构建及其功能研究

• 作者: 安广宇 戴克胜 阮长耿
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 抗体,双特异性 血小板糖蛋白GPIIb-IIIa复合物
• 年，卷（期）: 2002,（21）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1493-1497
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4178字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2002.21.015

摘要

目的构建、表达抗血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰbα/GPⅢa双特异单链抗体,为其进一步研究、应用奠定基础.方法应用PCR技术,扩增出接头片段和SZ-21单链抗体基因,克隆入pUCm-T载体,测序分析.应用基因重组技术将接头片段、SZ-21单链抗体基因和SZ-2单链抗体基因重组拼接,构建SZ-2/SZ-21双特异单链抗体表达载体pET22-21-L-2scFv,并测序验证.导入大肠杆菌BL21(DE3)Plys,诱导表达.流式细胞术、ELISA、Western blot检测SZ-2/SZ-21双特异单链抗体与血小板结合能力,瑞斯托霉素、凝血酶和ADP诱导血小板聚集试验对表达产物功能进行研究.结果表达载体pET22-21-L-2scFv构建拼接正确;表达产物以包涵体形式为主,表达量占菌体总蛋白的14%;经变性、纯化、复性,表达产物具有与血小板以及血小板GPⅠbα和Ⅲa结合活性,可抑制瑞斯托霉素、凝血酶和ADP诱导的血小板聚集并呈剂量依赖性.结论成功表达了SZ-2/SZ-21双特异单链抗体,该抗体具有与相应2个靶抗原结合活性,并可抑制瑞斯托霉素、凝血酶和ADP诱导的血小板聚集.