人von Willebrand因子A1区基因的克隆和表达

• 作者: 季顺东 王迎春 白霞 祝怀平 阮长耿
• 来源期刊: 中国实验血液学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: von Willebrand因子 基因克隆 基因表达 序列分析
• 年，卷（期）: 2002,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 540-543
• 页数: 4页
• 分类号: R554|Q785
• 字数: 2286字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-2137.2002.06.013

摘要

为了深入研究血栓形成的机制以及开发新的抗血栓药物,将人von Willebrand(vWF)因子A1区cDNA在大肠杆菌中表达,以获得高效表达的具有生物学活性的重组A1区蛋白,应用PCR方法从含有人全长vWF cDNA质粒中扩增A1区基因片段,并将其克隆至pUCm-T载体中,经DNA序列分析后,将其重组于有6×His Tag的融合蛋白表达载体pQE-31中,并在大肠杆菌M15中诱导表达.采用Ni-NTA柱进行纯化,用Western印迹鉴定.结果表明,PCR扩增得到854 bp的A1区基因片段,序列测定结果与文献报道一致.IPTG诱导5小时后表达的vWF因子A1蛋白占菌体总蛋白的30%左右,经Ni-NTA纯化后其纯度在95%以上.Western印迹检测显示A1蛋白具有很好的抗原性和特异性.结论:成功地在大肠杆菌中高效表达了人vWF A1区蛋白,为进一步研究vWF在血栓形成与止血中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阮长耿	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	188	746	13.0	17.0
2	白霞	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	58	167	6.0	8.0
3	季顺东	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	28	94	5.0	8.0
4	王迎春	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	13	22	3.0	3.0
5	祝怀平	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	7	27	3.0	5.0