酵母蛋白质YJL084c的磷酸化分析

• 作者: 敖世洲 石晓钟
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: PCL6 PCL7 YJL084c 磷酸化 酵母双杂交系统
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 433-438
• 页数: 6页
• 分类号: Q5
• 语种: 英文

摘要

PCL6、 PCL7(PAP1)和PHO80为酵母蛋白激酶PHO85的细胞周期蛋白因子, 同属于PHO80亚类, 它们在蛋白质序列上有较高的同源性,彼此在功能上有一定程度的重叠. YLR190w为先前鉴定的PCL7-PHO85的一个底物, 根据BLAST比较, YJL084c与YJLR190w在一段区域内有一定的同源性, 并且根据已公布公共数据库, YJL084c是PCL6的一个结合蛋白. 利用双杂交系统分析了YJL084c与这三个细胞周期蛋白因子之间的相互作用, 表明PCL7也可以结合YJL084c. 利用免疫共沉淀证实它们在体内的相互作用; 通过体外GST沉降分析, 验证它们的体外相互作用. YJL084c的体外翻译产物可以被PCL7-PHO85复合物磷酸化, 进一步分别表达纯化YJL084c的氨基末端、 中间和羧端三部分的GST融合蛋白片段, PCL7-PHO85复合物可以磷酸化其中间部分, 而对N末端和C末端则未表现出磷酸化. 以该中间片段蛋白质为底物, 进一步研究高低磷条件对其磷酸化的影响. PCL7-PHO85对YJL084c的磷酸化受到无机磷条件的明显影响: 高磷条件下, 磷酸化程度高; 而低磷条件下磷酸化程度低. 有意思的是, PCL6-PHO85免疫沉淀复合物也表现出同样的磷酸激酶特征. 于是分析PHO81与这三个细胞周期因子之间相互作用. 此外, 还构建了Yjl084c的缺失株, 分析了缺失的可能影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	敖世洲	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室	10	53	2.0	7.0
2	石晓钟	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室	2	0	0.0	0.0