小鼠蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与序列分析

• 作者: 刘新光 彭海艳 梁念慈 郑克勤 陈小文
• 来源期刊: 广东医科大学学报
• 关键词: β调节亚基/蛋白激酶CK2/小鼠 表达载体pT7-7 分子克隆 DNA序列分析
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: Q555+.7|Q784|Q523+.8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4057.2002.01.001

摘要

目的:构建小鼠蛋白激酶CK2 β亚基cDNA重组表达质粒,以便深入进行CK2结构与功能的研究.方法:通过反转录PCR从NIH3T3 小鼠成纤维细胞中获得小鼠蛋白激酶CK2 β亚基编码区cDNA,PCR扩增酶为高保真DNA聚合酶.将Nde I/HindⅢ彻底双酶切PCR产物定向连接到牛小肠碱性磷酸酶去5′端磷酸的同样彻底Nde I/HindⅢ双酶切的表达载体pT7-7中,转化感受态大肠杆菌DH5α获得转化子,用0.8%琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子,将阳性克隆进行单和双酶切分析鉴定.随机挑选两个阳性克隆进行DNA测序.结果:转化子的阳性筛选率为100%,限制性酶切分析结果表明插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符.DNA测序结果表明:两个重组小鼠CK2 β亚基克隆中的插入片段序列均与两种已报道的小鼠 CK2 β亚基 cDNA编码区序列分别存在一个碱基差异,但我们报道的这2个差异碱基与大鼠、兔、猪和人CK2 β亚基cDNA的编码区相应碱基序列一致.结论:本实验克隆的小鼠蛋白激酶CK2 β亚基cDNA编码区序列可能是正确的序列.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁念慈	广东医学院生物化学和分子生物学研究所	252	1946	22.0	32.0
2	郑克勤	广东医学院医学遗传研究室	42	166	7.0	11.0
3	刘新光	广东医学院生物化学和分子生物学研究所	166	878	14.0	23.0
4	陈小文	广东医学院生物化学和分子生物学研究所	18	94	6.0	9.0