人蛋白激酶CK2 3个亚基cDNA的克隆与测序

• 作者: 刘新光 梁念慈 陈小文 马涧泉
• 来源期刊: 广东医科大学学报
• 关键词: α、α′、β亚基/蛋白激酶CK2/人 表达载体pT7-7 分子克隆 DNA序列分析
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 172-174
• 页数: 3页
• 分类号: Q555+.7|Q784|Q523+.8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4057.2002.03.004

摘要

目的:构建人蛋白激酶CK2 α、α′和β亚基cDNA重组表达质粒深入进行CK2结构与功能的研究.方法:利用RT-PCR、定向克隆和DNA测序等进行本实验.结果:通过反转录PCR从HL-60细胞中获得了人蛋白激酶CK2 α、α′和β亚基编码区cDNA,将Nde I /HindⅢ双酶切的3种PCR产物分别与同样双酶切的表达载体pT7-7进行定向连接.CaCl2法分别转化DH5 α获转化子,快速提取质粒DNA进行电泳初筛得到阳性克隆.限制性酶切分析结果表明插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符.每种CK2亚基都各随机挑选4个阳性克隆,PEG法进行纯化.采用PE ABI的Big Dye荧光标记的终止底物循环测序试剂盒,使用各种引物进行正反向DNA测序.通过测序分别在每种CK2 α、α′和β亚基的4个阳性克隆中筛选到2个、1个和2个含完全正确的人CK2 α、α′和β亚基cDAN的重组质粒克隆,其余的克隆均存在1～2个碱基突变.我们将这种含正确序列的重组质粒分别命名为pTCKA、pTCKA′和pTCKB.结论:CK2全套3个亚基重组质粒克隆的成功,将为在原核细胞中表达人CK2 α、α′和β亚基以及利用人CK2 α、α′和β cDNA作为探针进行深入研究打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁念慈	广东医学院生物化学和分子生物学研究所	252	1946	22.0	32.0
2	马涧泉	中山医科大学生化教研室	15	106	6.0	10.0
3	刘新光	广东医学院生物化学和分子生物学研究所	166	878	14.0	23.0
4	陈小文	广东医学院生物化学和分子生物学研究所	18	94	6.0	9.0