LIGHT基因的克隆及其可溶性表达

• 作者: 吴东 吴孟超 娄永华 沈锋 焦炳华
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人LIGHT基因 基因克隆 基因表达 生物学功能
• 年，卷（期）: 2002,（5）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 541-545
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 4371字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2002.05.024

摘要

目的克隆LIGHT基因,构建含有人LIGHT基因的表达载体,诱导其在大肠杆菌中可溶性表达,并对表达的LIGHT蛋白的生物学活性进行检测. 方法从人的外周血单个核细胞中克隆LIGHT全长cDNA及其胞外区片段,并将其胞外区片段亚克隆至原核表达载体pET-11a中,筛选阳性重组质粒pET-LIGHT,以IPTG诱导其可溶性表达,并以SDS-PAGE和Western blot检测进行分析.表达的蛋白初步纯化后,进行生物学活性分析. 结果 RT-PCR扩增出了LIGHT全长723bp的cDNA.SDS-PAGE和Western blot分析证实重组pET-LIGHT质粒可表达出相对分子质量(Mr)为19×103的蛋白.可溶性LIGHT重组蛋白可共刺激T细胞的增殖及诱导IFN-γ的产生. 结论本实验成功地将LIGHT胞外区片段在大肠杆菌中进行表达,表达的蛋白具有生物学功能,这为进一步的LIGHT基因的功能研究打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴孟超		466	5098	32.0	53.0
2	焦炳华	第二军医大学基础部分子生物学与生物化学教研室	215	1714	20.0	33.0
3	沈锋		124	1043	13.0	28.0
4	娄永华	第二军医大学基础部分子生物学与生物化学教研室	36	203	8.0	12.0
5	吴东		23	110	4.0	10.0