可溶性GPC3基因的克隆及酵母表达

• 作者: 李小波 金小宝 陈洁鸿 马艳 鲍冬梅
• 来源期刊: 广东药学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 可溶性GPC3 基因 克隆 酵母表达
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 医学研究
• 页码范围: 358-362
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 字数: 3656字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-8783.2014.03.023

摘要

目的 克隆可溶性磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(soluble glypican-3,sGPC3)基因,并分泌表达重组蛋白.方法 通过RT-PCR克隆sGPC3 cDNA,利用EcoR Ⅰ和XbaⅠ酶切位点,将sGPC3基因插入酵母表达载体pPICZαA中,构建真核表达质粒pPICZαA-sGPC3,以该表达质粒转染酵母菌株X-33,在含有Zeozin的YPD平板上进行筛选,然后对PCR鉴定为阳性的酵母重组子进行甲醇诱导表达,表达上清经SDS-PAGE和Western blot检测.结果 使用特异性引物进行RT-PCR,获得约1 600 bp左右与目的基因大小相符的条带,构建的真核表达质粒pPICZαA-sGPC3表达框正确无误,阳性酵母重组子x-33/pPICZαA-sGPC3诱导表达上清在60 000处有与预期大小相符的蛋白条带,且该蛋白条带与抗6×His单克隆抗体孵育后呈现特异性反应.结论 成功克隆了可溶性GPC3基因,并在毕赤酵母中获得分泌表达,为进一步研究sGPC3对肝细胞癌的作用及作用机制、开发一种生物治疗肝癌的新型药物奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金小宝		100	490	12.0	15.0
3	马艳		20	105	6.0	9.0
5	李小波		10	74	4.0	8.0
13	鲍冬梅		1	1	1.0	1.0
14	陈洁鸿		1	1	1.0	1.0