SARS-CoV GDH株N蛋白全长基因克隆及其可溶性表达

• 作者: 吴英松 宁云山 曹开源 李明 杭建峰 汤永平
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: SARS-CoV RT-PCR N蛋白 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2005,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 666-669
• 页数: 4页
• 分类号: R373
• 字数: 3167字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2005.08.006

摘要

目的构建SARS冠状病毒N蛋白的原核表达质粒,诱导重组蛋白表达并纯化,鉴定其抗原性.方法以我国SARS冠状病毒GDH株总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增N 蛋白的全长基因,TA克隆后测序.构建pET-23d的N基因表达载体,用IPTG诱导目的蛋白表达,利用硫酸铵沉淀、分子筛层析及离子交换层析纯化重组蛋白,免疫印迹鉴定重组蛋白.结果 RT-PCR扩增出1269bp SARS冠状病毒N蛋白的基因片段,其序列分析结果与SARS-CoV GD01、BJ01株的同源性为99.92%;该基因在大肠杆菌表达系统中高效表达,占可溶性蛋白的33.57%,表达产物为非融合的可溶性蛋白, Western blot结果显示重组N蛋白具有良好的抗原性;纯化后重组N蛋白纯度为92.9%.结论成功构建了SARS冠状病毒N蛋白的重组表达质粒,并在大肠杆菌中以非融合蛋白的形式得到高效的可溶性表达,为SRAS的诊断和疫苗的研制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹开源	中山大学医学检验系	61	218	8.0	10.0
2	吴英松	第一军医大学热带医学研究所	30	209	8.0	13.0
3	李明	第一军医大学热带医学研究所	80	419	10.0	16.0
4	宁云山	第一军医大学热带医学研究所	8	117	3.0	8.0
5	汤永平		8	44	4.0	6.0
6	杭建峰	第一军医大学热带医学研究所	3	93	2.0	3.0