修饰后中国山东地方株HPV16 E6E7基因的转化活性检测及免疫原性研究

• 作者: 刘小娟 司静懿 宋国兴 张明策 朱明昭 罗利群 许雪梅 郭秀婵
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒16型 E6基因 E7基因 DNA疫苗 细胞毒性T淋巴细胞 抗体
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 427-432
• 页数: 6页
• 分类号: R37
• 字数: 4813字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2002.04.023

摘要

目的利用突变修饰后消除转化活性并保留抗原性的中国山东地方株人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6E7基因, 研制HPV16 DNA疫苗. 方法定点突变E6的终止密码,并保证E7读码框架不变;定点突变E7蛋白的Rb结合区中对其转化活性维持起关键作用的第24位氨基酸.突变修饰后的基因命名为fmE6E7.PCR扩增fmE6E7,重组入pLNCX载体,脂质体法转染3T3细胞,免疫荧光组织化学及Western blot检测转染细胞蛋白的表达.经软琼脂集落培养法和BALB/c裸鼠皮下接种法检测fmE6E7的转化活性.然后PCR扩增fmE6E7,构建pVR1012-fmE6E7真核表达质粒,于C57BL/6小鼠肌肉内直接进行裸DNA免疫,51Cr释放法体外分析免疫鼠的细胞毒性T淋巴细胞活性,间接ELISA法检测免疫鼠血清中E7特异性抗体. 结果测序证实获得了预期的突变结果.pLNCX-fmE6E7转染细胞体外软琼脂培养3周未见集落形成;裸鼠皮下接种2月后未见移植瘤形成(0/3).免疫鼠获得了较好的E7特异性的抗体E和抗原特异性的CTL. 结论修饰后E6E7基因可融合表达,转化活性消除的同时还可诱发特异的细胞免疫和体液免疫,表明中国山东地方株的E6E7基因可作为HPV16治疗性DNA疫苗的靶基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗利群	肿瘤研究所免疫室	1	4	1.0	1.0
2	郭秀婵	预防医学科学院病毒所	1	4	1.0	1.0