慢性粒细胞白血病MGMT基因的克隆及逆转录病毒表达载体的构建

• 作者: 任志娟 吴镇宇 孙等军 张旭 张维 方琴 王季石 肖芸 陈剑
• 来源期刊: 贵阳医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 血白病,髓样,慢性 基因表达 病毒
• 年，卷（期）: 2002,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 471-475
• 页数: 5页
• 分类号: R733.72|Q785
• 字数: 4000字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2707.2002.06.001

摘要

目的:从慢性粒细胞白血病病人外周血中克隆人MGMT基因,并进行逆转录病毒表达载体的构建.方法:用RT-PCR方法从慢性粒细胞白血病病人外周血白细胞中克隆得到长为 684 bp MGMTcDNA.将该片段与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌DH5后得到重组质粒pGEM -T-MGMT,进行限制性内切酶酶切分析、PCR及测序鉴定.再将MGMTcDNA亚克隆到G1Na逆转录病毒载体EcoRⅠ和xhoⅠ位点之间,并进行酶切、PCR鉴定.结果:成功克隆了人MGMT基因,经酶切分析、PCR初步筛选及测序鉴定证实序列正确,并成功构建到逆转录病毒载体上.结论:通过克隆人MGMT基因,并构建逆转录病毒载体G1N a-MGMT,为探讨将耐药基因导入造血干细胞对烷化剂类化疗药物抗性的研究奠定了基础.