人突变p27重组腺病毒的构建及其在结肠癌细胞SW480中的表达

• 作者: 徐少勇 王家宁 邓长生 陈珺 黄永章
• 来源期刊: 郧阳医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组腺病毒 p27mt基因 基因治疗
• 年，卷（期）: 2003,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 324-326,345
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 2987字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-9674.2003.06.002

摘要

目的:为了探讨腺病毒载体用于基因治疗的可行性及突变p27的抗肿瘤特性,构建复制缺陷型重组hp27mt基因腺病毒.方法:hp27mt自载体pORF9-hp27mt中切出,经2次亚克隆,插入到穿梭质粒pShuttle-CMV中,形成转移质粒pShuttle-CMV-hp27mt;然后再用PmeI线性化的pShuttle-CMV-hp27mt转化含腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的超感受态BJ5183,使其在细菌内发生同源重组.重组质粒鉴定正确后经Pac Ⅰ酶切,转入Ad293细胞,包装成重组腺病毒Ad-hp27mt.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用紫外分光光度计进行滴度测定.用重组p27mt的腺病毒Ad-p27mt感染大肠癌细胞SW480,Western Blot检测p27蛋白的表达.结果:用含pShuttle-CMV-hp27mt转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183后,可获得约30%的阳性重组质粒.PCR检测表明重组腺病毒DNA中含有目的基因.重组腺病毒滴度为7.95×1015 pfu/L.转染大肠癌细胞后,p27在SW480中获得了高表达,而未转染细胞和Ad-LacZ转染的细胞中仅有低表达.结论:腺病毒作为一种基因转移载体,可有效介导p27在肿瘤细胞中的表达,在肿瘤基因治疗方面具有很大的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐少勇	郧阳医学院附属人民医院消化科	68	210	7.0	11.0
2	邓长生	武汉大学中南医院消化内科	194	1314	18.0	24.0
3	王家宁	郧阳医学院临床医学研究所	119	709	13.0	20.0
4	黄永章	郧阳医学院临床医学研究所	66	379	11.0	16.0
5	陈珺	郧阳医学院附属人民医院消化科	18	58	3.0	6.0