降落聚合酶链反应技术在低密度脂蛋白受体基因点突变研究中的应用

• 作者: 刘舒 曹守春 杜兰平 潘晓冬 王绿娅 秦彦文 蔺洁 陈保生
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 聚合酶链反应 低密度脂蛋白受体 基因突变 家族性高胆固醇血症
• 年，卷（期）: 2003,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 403-406
• 页数: 4页
• 分类号: R54
• 字数: 2847字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1009-9158.2003.07.004

摘要

目的建立降落(TOUCH DOWN)聚合酶链反应(PCR)方法, 快速检测家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因点突变. 方法设计 LDL-R基因21对引物,根据TOUCH DOWN 原理设计包括启动子和18个外显子特异性片段在内的PCR程序,通过试验选择PCR最佳反应条件,在同一程序中分别对21个片段进行扩增,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物,纯化后DNA产物测序分析该方法的特异性.结果编设退火温度范围从68℃降至54℃的PCR程序,优化PCR扩增条件,电泳检测采用同一程序同时分别扩增的LDL-R基因21个片段条带清晰,测序证实了此组片段的特异性.结论成功建立降落PCR方法,提示此法为LDL-R基因突变筛查提供了快速可靠的手段.