大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶与tRNALeu的相互作用头孢菌素酰化酶的表达、翻译后加工和亚基重组

• 作者: 李勇 王恩多
• 来源期刊: 中国科学院研究生院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: tRNALeu 亮氨酰-tRNA合成酶相互作用 头孢菌素酰化酶 假单孢菌 亚基重组
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 优秀博士论文摘登
• 页码范围: 117-122
• 页数: 6页
• 分类号: Q814
• 字数: 1525字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-1175.2003.01.019

摘要

第一部分:为得到大量的大肠杆菌tRNALeu1和tRNALeu2,研究tRNA与亮氨酰-tRNA合成酶(LeuRS)的相互作用,用基因克隆的方法高表达并纯化了它们;测定了接受活力和被LeuRS催化的动力学常数;改进了RNA体外转录必需的T7RNA聚合酶的纯化方法,优化了转录条件,转录序列比文献值高10倍.用体外转录方法得到了各种在接受茎突变的tRNALeu变种,研究了一个在CP1结构域插入40个氨基酸残基的变种LeuRS-A对tRNALeu2种等受体的识别,证明了tRNA Leu1和tRNALeu2接受茎上的第一对硷基对是否摆动是LeuRS-A识别的关键.第二部分:在大肠杆菌中高表达头孢菌素酰化酶基因10倍以上.研究了它的α-亚基的N-端变化(LAEP…→MGIP…)对酶学动力学常数的影响.构建了带有不同抗菌素抗性和启动子的高表达质粒,研究了它们表达的特点,分析了这些质粒的不同用途.用含有编码该酶两个亚基的基因的相容质粒共转化的方法.研究了它们在体内的重组和前体的加工.研究结果表明,该酶可能属于一类新的N-端亲和水解的酰化酶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李勇	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室	225	3185	28.0	48.0
2	王恩多	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室	30	180	5.0	13.0