α-synuclein-pEGFP真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达

• 作者: 张宇新 徐群渊 杨慧 苏月 苏玉金 赵春礼 赵焕英
• 来源期刊: 神经解剖学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: α-synuclein 绿色荧光蛋白 原位杂交荧 光免疫细胞化学
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 124-128
• 页数: 5页
• 分类号: R322
• 字数: 3446字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7547.2003.02.002

摘要

为了构建α-synuclein-pEGFP真核表达载体,检测其在SH-SY5Y细胞内的表达,本研究应用下述方法:PCR扩增α-synuclein基因并消除终止密码子;PCR产物连入pGEM T-easy载体,经测序确认无误后,亚克隆入pEGFP-N1,构建α-synucle-in-pEGFP真核表达载体;LipofectAMINE法转染SH-SY5Y细胞;荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,原位杂交和免疫荧光细胞化学法检测α-synuclein mRNA及其蛋白表达.结果显示,该载体转染SH-SY5Y细胞后,可在细胞内观察到报告基因和目的基因的表达产物.结论:α-synuclein-pEGFP真核表达载体构建成功,并可在细胞内表达.本工作为今后动态观察研究α-synu-clein致Parkinson病多巴胺能神经细胞损伤机制奠定基础.