pAcGFP1-C1-Ngb真核表达载体的构建及在SH-SY5Y细胞中的表达

• 作者: 杨前 高殿文
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Ngb 载体构建 SH-SY5Y细胞 转染
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 172-174,182
• 页数: 4页
• 分类号: Q253|Q279
• 字数: 2845字
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆SD大鼠脑红蛋白(Ngb)基因至真核表达载体pAcGFP1-C1,构建表达质粒pAcGFP1-C1-Ngb,并转染至人SH-SY5Y细胞表达Ngb蛋白.方法 提取大鼠肝脏组织总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增大鼠Ngb基因,与双酶切的pAcGFP1-C1连接,从而构建pAcGFP1-C1-Ngb真核表达质粒.转染SH-SY5Y细胞,并用Western blot的方法鉴定Ngb蛋白在SH-SY5Y细胞中的表达.结果 获得SD大鼠Ngb基因全长序列和重组真核表达载体pAcGFP1-C1-Ngb.Western blot结果显示,转染pAcGFP1-C1-Ngb后的SH-SY5Y细胞Ngb基因有稳定的表达.结论 成功地克隆了SD大鼠Ngb基因、构建了pAcGFP1-C1-Ngb真核表达载体,并在人SH-SY5Y细胞中获得Ngb蛋白的稳定表达,为进一步研究Ngb基因在细胞中的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高殿文	中国医科大学附属盛京医院眼科	79	394	11.0	15.0
2	杨前	大连医科大学附属第二医院眼科	2	1	1.0	1.0