Q型人血清对氧磷酶在杆状病毒感染的昆虫细胞中的表达

• 作者: 孙曼霁 张杰 朱洁 武军华 池木根 滕霞 王淑豪 秦浚川 邵宁生
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因重组 对氧磷酶 杆状病毒科 昆虫 细胞
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 131-135
• 页数: 5页
• 分类号: R972.9
• 字数: 4389字
• 语种: 英文

摘要

目的研究对氧磷酶与心血管疾病的关系.方法采用BAC-TO-BAC杆状病毒系统表达Q型人血清对氧磷酶(PON-1),在已获得人PON-1全长cDNA的基础上,通过PCR扩增,得到上游含EcoRⅠ酶切位点,下游不含终止密码子而含HindⅢ酶切位点的PON-1基因,将其克隆到带有6×His@Tag的pFASTBACⅡCD14质粒中,构建杆状病毒转移载体pFASTBACⅡ-PON-1.将含有PON-1基因的重组质粒pFASTBACⅡ-PON-1转化DH10BAC感受态细胞,使目的基因通过同源重组插入Bacmid DNA中.PCR鉴定正确后再转染入sf9昆虫细胞中,产生有感染力的重组杆状病毒.用乙酸苯酯为底物测定表达上清液中的酶活性.结果比较不同感染复数(MOI)和不同感染时间PON-1在培养上清液中的表达情况,确定感染复数MOI为6～8,感染时间96～108 h为PON-1的最佳表达条件,产率约为4.5 mg@L-1上清液.免疫印迹法表明重组蛋白有与抗6×His单克隆抗体结合的抗原性.顺磁共振实验证明,基因工程产人重组血清对氧磷酶rhPON-1能有效清除Fe2+诱导亚油酸脂质过氧化产生的脂质自由基,清除率为55.9%.结论BAC-TO-BAC杆状病毒介导的草地贪夜蛾昆虫细胞sf9可高效表达Q型人血清对氧磷酶.