布氏杆菌PCR检测方法的建立

• 作者: 王胜昌 谢建云 邵伟娟 高诚
• 来源期刊: 上海实验动物科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 布氏杆菌R型(粗糙型)抗原 布氏杆菌S型(光滑型)抗原 PCR
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 实验动物与动物实验
• 页码范围: 154-156
• 页数: 4页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 1885字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2003.03.008

摘要

根据编码31-kDa布氏杆菌蛋白的基因(BSCP31),设计两对引物.对布氏杆菌R型(粗糙型)抗原及S型(光滑型)抗原、大肠杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、螺旋杆菌、绿脓杆菌分别采用两种提取、纯化DNA的方法,并以纯化的各细菌DNA为模板,分别进行内、外引物PCR反应及套式PCR反应,反应时以灭菌超纯水作为空白对照.结果显示:进行内、外引物PCR反应和套式PCR反应时,布氏杆菌R型及S型均出现预期的扩增带594 bp、460 bp及460 bp,且套式扩增后条带亮度明显增强,而作为验证PCR特异性或对照的大肠杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、螺旋杆菌、绿脓杆菌、灭菌超纯水均无扩增带.验证敏感性时用外引物对布氏杆菌R型、S型DNA进行扩增后,最低可检测到1 Pg的布氏杆菌DNA.