利用Hsp基因调控元件构建胞内表达的E.coli-BCG穿梭载体

• 作者: 史皆然 戚好文 李元 李别虎 范雄林
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 穿梭载体 分枝杆菌 表达
• 年，卷（期）: 2003,（8）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 629-632
• 页数: 4页
• 分类号: R37
• 字数: 2867字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2003.08.015

摘要

目的构建能够携带外源蛋白基因并能在胞内表达的E.coli-BCG (Bacille Calmette-Guerin)穿梭载体. 方法用多聚酶链式反应(PCR)从结核分枝杆菌毒株H37Rv基因中扩增出结核分枝杆菌热休克蛋白(Hsp)60 N端6个氨基酸及其上游调控元件基因,克隆入E.coli-BCG穿梭载体pOLYG中,以屋尘螨抗原(Der p2)为外源蛋白,用间接免疫荧光染色法观察该载体介导的Der p2基因在牡牛分枝杆菌(M.vaccae)宿主中的表达. 结果经测序证实所克隆的Hsp60ss基因序列正确,所构建的胞浆内表达E.coli-BCG穿梭载体(pIC)能完成在大肠杆菌和M.vaccae细胞之间的穿梭,并介导抗生素抗性基因的表达,经免疫荧光检查外源基因Der p2可表达于M.vaccae宿主胞内,并受到培养温度的调节. 结论成功构建了在M.vaccae胞内表达外源蛋白的E.coli-BCG穿梭载体.