转ARL-1基因HepG2细胞耐药相关基因的筛选

• 作者: 唐大年 曹德良 杨向东 王建
• 来源期刊: 癌症
• 学科: 医学
• 关键词: 基因芯片 醛糖还原酶相似基因1 肝细胞癌 耐药相关基因
• 年，卷（期）: 2003,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1289-1295
• 页数: 7页
• 分类号: R735.7
• 字数: 5022字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-467X.2003.12.011

摘要

背景与目的:醛糖还原酶相似基因1(aldose-reductase like gene-1,ARL-1)在原发性肝癌中高表达,与肝癌细胞对化疗药物耐药有关.本研究拟建立转染ARL-1的人肝癌细胞株,观察转染ARL-1的HepG2细胞对含醛基抗肿瘤药物耐药性的改变,利用基因表达谱芯片筛选HepG2细胞转染ARL-1后差异表达耐药相关基因.方法:采用脂质体转染PBK/ARL-1质粒到HepG2细胞,获得高表达ARL-1的单克隆细胞株;RT-PCR、流式免疫荧光和免疫组化鉴定高表达ARL-1的HepG2细胞;应用MTT法和细胞凋亡分析研究HepG2细胞和转染ARL-1的HepG2细胞对含醛基抗肿瘤药物阿霉素(ADM)和丝裂霉素(MMC)的耐药性,以5-氟尿嘧啶(5-FU)(不含醛基)为对照;将Cy3和Cy5两种荧光染料分别标记两种细胞的cDNA探针,与人肝癌基因表达谱芯片进行杂交与扫描,观察转染ARL-1基因HepG2与对照组HepG2细胞在基因表达谱方面的差异,筛选耐药相关基因,并运用RT-PCR和Western blot对部分差异表达相关基因进行初步证实.结果:与对照组HepG2细胞相比,转染ARL-1基因HepG2细胞高表达ARL-1蛋白,明显增强对含醛基的抗肿瘤药物如ADM、MMC的耐药性,分别提高2.6倍和3.47倍,用5-FU处理两组细胞,则未发现有明显的耐药差异(ADM组t=6.39,P＜0.05;MMC组t=30.06,P＜0.01;5-FU组t=O.684,P＞0.05);芯片扫描结果发现15个基因下调表达,9个基因上调表达,RT-PCR和Western blot验证部分差异表达基因如泛素和多药耐药基因的表达,与芯片检测结果一致.结论:高表达ARL-1 HepG2细胞增强对含醛基抗肿瘤药物的耐药性,多药耐药基因的表达增高和泛素表达下调可能与其耐药性增强有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹德良	南华大学分子生物中心	4	27	2.0	4.0
2	杨向东	南华大学分子生物中心	44	222	8.0	12.0
3	唐大年	中南大学湘雅二医院外科	2	26	2.0	2.0
4	王建	南华大学分子生物中心	5	76	4.0	5.0