重组人BAFF112-285的制备及活性分析

• 作者: 何凤田 吉青 李蓉芬 江渝 郑汉其 郑英如 钟小林 陈敏 高会广
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: TNF家族的B细胞激活因子(BAFF) cDNA克隆 原核表达 淋巴细胞活化
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 178-182
• 页数: 5页
• 分类号: R730.3
• 字数: 3712字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8861.2003.03.004

摘要

目的制备具有功能活性的重组人TNF家族的B细胞激活因子(B cell activating factor belonging to the TNF fa-mily,BAFF)胞外区112～285氨基酸残基段(rhBAFF112-285),为BAFF的深入研究奠定基础.方法提取人HL-60细胞总RNA,经RT-PCR扩增编码人BAFF胞外区112～285氨基酸残基(BAFF112-285)的cDNA,行序列测定后,构建于原核表达载体pQE-80L并转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达rhBAFF112-285,Ni2+-NTA层析纯化,进而经3H-TdR掺入实验检测其免疫学活性.结果RT-PCR扩增得到了 525bp的DNA片段,序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF112-285的cDNA序列一致,该胞外区片段在大肠杆菌中获得了高效表达,表达水平达细菌总蛋白的45.7%,经纯化后纯度可达98.4%,活性检测证实其能明显刺激外周血淋巴细胞活化.结论利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF112-285,所获纯化产物具有生物学活性,所获结果为进一步研究创造了条件.