信号肽序列对毕赤酵母表达外源蛋白质的影响

• 作者: 姚泉洪 张嗣良 彭日荷 李贤 熊爱生 范惠琴 郭美锦
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 毕赤酵母 信号肽序列 表达载体 高效表达
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 154-160
• 页数: 7页
• 分类号: Q5
• 语种: 英文

摘要

乙醇氧化酶启动子被分离、克隆, 并建立了转化方法后, 毕赤酵母已被发展成为一种高效的外源蛋白表达宿主. 为了进一步提高外源蛋白质的分泌表达, 对信号肽序列进行了研究. 首先按毕赤酵母的偏爱密码合成了酿酒酵母的α因子信号肽序列MF4I, 随后在MF4I信号肽序列的N端分别引入1～10个毕赤酵母Aox1蛋白质的N端氨基酸, 构成10种不同的分泌信号肽序列, 10种不同的分泌信号肽序列被用于植酸酶基因的毕赤酵母分泌表达. 以上新的信号肽序列都可使植酸酶的分泌表达量增加, 而以N端增加A、I、P三个氨基酸的信号肽序列引起的提高最大; 和野生型的酿酒酵母α因子信号肽序列相比, 使植酸酶分泌表达量增加5倍, 摇瓶中植酸酶的分泌表达量为90 mg/L. 此外在MF4I信号肽的引导序列和内切蛋白酶间增加了E E A E A E A E P 和K共10个氨基酸, 进一步提高信号肽的分泌效率, 使表达又提高约35%, 使得摇瓶中酸性植酸酶的表达量达到120 mg/L, 是pPCI9K表达量的8倍.