白蛋白信号肽引导天然N-端的rBPTI 在毕赤酵母中高效分泌表达

• 作者: 凡炼炼 杨莉莉 潘秦 牟旭鹏 范伟全 董文 贺巾超 颜炜群
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 牛胰蛋白酶抑制剂 白蛋白信号肽 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 17-20
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3475字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2007.01.005

摘要

目的:探讨在毕赤酵母(Pichia pastoris)中高效分泌表达具有天然N-端序列的rBPTI.方法:将白蛋白信号肽(hsasp)和bpti基因连接并构建真核表达载体pPICZ/hsasp-bpti,电击转化毕赤酵母菌株X-33,用PCR法、SDS-PAGE和胰蛋白酶抑制活性分析筛选阳性转化菌.结果:转染pPICZ/hsasp-bpti的毕赤酵母X-33工程菌能够高效地分泌表达rBPTI;培养上清中rBPTI含量约200 mg·L-1;SDS-PAGE和质谱分析结果显示rBPTI相对分子质量分别为6 500和6 508;rBPTI的N-端测序结果表明其N-端15个氨基酸序列与天然BPTI完全一致;胰蛋白酶活性抑制分析结果表明,抑制常数Ki=(2.6±0.1)×10-9,与天然BPTI一致.结论:hsasp能够在毕赤酵母中高效地引导分泌表达天然N-端氨基酸序列的rBPTI,其表达量达200 mg·L-1.